雞傳染性支氣管炎病毒CK-CH-LHLJ-04V株雞胚傳代致弱及其免疫效力的初步評(píng)價(jià).pdf

1、雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)雞胚傳代致弱的活疫苗在雞傳染性支氣管炎(Infectious Bronchitis,IB)的預(yù)防控制中起重要作用.但I(xiàn)BV血清型眾多,新的IBV變異毒株不斷出現(xiàn),而IB疫苗在不同血清型病毒之間僅提供部分或不能提供有效的交叉保護(hù)作用,這是免疫雞群感染IBV并造成疾病流行和傳播的主要原因.因此基于分子流行病學(xué)研究結(jié)果的新弱毒疫苗的研制,對(duì)于預(yù)防和控制特定地

2、區(qū)IB的發(fā)生和流行具有重要作用. 本實(shí)驗(yàn)從黑龍江某雞場(chǎng)的肉雞腎臟中分離到一株病毒,并命名為CK/CH/LHLJ/04V.通過致SPF雞胚病變特征、對(duì)雞外周血紅細(xì)胞凝集特性、形態(tài)學(xué)特征、RT-PCR鑒定以及動(dòng)物回歸試驗(yàn)等方面的研究,表明該病毒為IBV.通過對(duì)CK/CH/LHLJ/04V S1基因序列測(cè)定及與參考毒株序列比較顯示,該毒株屬我國目前主要流行的基因型,具有代表性.因此本實(shí)驗(yàn)以CK/CH/LHLJ/04V毒株為研究對(duì)象,通

3、過SPF雞胚連續(xù)傳代致弱,以期制備一株IB弱毒疫苗的候選毒株. CK√CHLHLJ/04V在SPF雞胚傳代過程中,病毒滴度逐漸上升,接種雞胚病變典型,毒株已高度適應(yīng)雞胚.與之相反,其對(duì)SPF雛雞的致病力隨雞胚傳代次數(shù)的增加而逐漸降低.CK/CH/LHLJ/04V第70代(P70)病毒已不能致雛雞死亡,但接種雞仍出現(xiàn)臨診發(fā)病癥狀,耐過雞能對(duì)同源第5代(P5)強(qiáng)毒的攻擊形成完全保護(hù). CKCH/LHLJ/04V毒株在SPF雞

4、胚上連續(xù)傳至110代(Pll0)后已充分致弱,接種雞未見臨診癥狀.本實(shí)驗(yàn)通過抗體變化情況、致病性同源毒株攻毒后臨診癥狀以及對(duì)腎臟、氣管的保護(hù)效果三個(gè)方面對(duì)CK/CH/LHLJ/04V Pll0的免疫效力進(jìn)行評(píng)價(jià).結(jié)果顯示,CK/CH/LHLJ/04V Pll0接種雛雞后20天抗體陽性率僅為60﹪-70﹪;接種過CK/CH/LHLJ/04V P110的雛雞攻同源強(qiáng)毒P5后發(fā)病率為20﹪-40﹪,死亡率為20﹪-30﹪;對(duì)CK/CH/LHL

5、J/04V P5強(qiáng)毒攻毒后5天采集的臟器樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示CK/CH/LHLJ/04V P110僅對(duì)40﹪-50﹪的雛雞腎臟、氣管提供保護(hù)作用.由此可知,IBV CK/CH/LHLJ/04V在SPF雞胚上連續(xù)傳至110代后,雖對(duì)SPF雛雞的致病力已降低,但同時(shí)免疫原性可能也因?yàn)閭鞔螖?shù)過多而減弱,而CK/CH/LHLJ/04V P70病毒雖具有良好的免疫原性但未完全致弱.所以我們希望可以在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中從P70與P110之間選擇一個(gè)既完

6、全致弱又保留有良好免疫原性的代次毒作為研制IB弱毒疫苗的候選毒株. 目前認(rèn)為IBV的致病力與其S1基因相關(guān),但缺乏直接的證據(jù).為了研究IBVCK/CH/LHLJ/04V毒株致病力變化與其S1基因核苷酸及推導(dǎo)氨基酸序列的相關(guān)性,本實(shí)驗(yàn)對(duì)傳代前后病毒的S1基因進(jìn)行了序列比較,發(fā)現(xiàn)cK/CH/LHLJ/04v毒株雞胚傳代后,其S1基岡有3個(gè)核苷酸變異,導(dǎo)致相應(yīng)的3個(gè)氨基酸殘基發(fā)生替代.由于IBV基因組較人(約27.6kb),本實(shí)驗(yàn)只研