人紅系終末分化中不同期幼稚細胞的分離和功能研究.pdf

1、紅血球的生成，是造血干細胞定向往紅細胞發(fā)育，成熟的過程，是一個連續(xù)而又具有階段性的過程。血型糖蛋白A的出現(xiàn)表示紅系終末分化的開始，細胞從原成紅細胞開始向嗜堿性幼紅細胞，嗜多色性幼紅細胞，正染色幼紅細胞增殖分化，最后細胞脫核后變成網織紅細胞。網織紅細胞經過成熟變成成熟紅細胞后通過骨髓進入血液循環(huán)系統(tǒng)。
　　本文建立了一個穩(wěn)定的模擬紅系體內發(fā)育的培養(yǎng)體系，并運用蛋白質印跡實驗和流式細胞學分析法檢測了數(shù)十種紅系發(fā)育相關的膜表面蛋白，骨架

2、蛋白以及跨膜蛋白在培養(yǎng)過程中表達水平的變化。實驗結果表明，Band3在發(fā)育過程中上升的幅度最為明顯而α4integrin，一種粘附分子，先是保持高表達水平，而后降至最低。我們選取了Band3和α4 integrin這兩個變化最大的膜蛋白作為標記物，搭配血型糖蛋白A，紅系的特異性標記物，對我們的培養(yǎng)體系的分化過程進行了監(jiān)測，并選取了第7天和第14天的細胞進行流式細胞分選。我們在第7天的細胞中得到了具有形態(tài)學特征的原成紅細胞，早期嗜堿性幼紅

3、細胞，晚期嗜堿性幼紅細胞和嗜多色性幼紅細胞，我們在第十四天的細胞中得到了具有形態(tài)學特征的嗜多色性幼紅細胞和正染色幼紅細胞，流式細胞分選得到的細胞純度達到90％以上。為了檢測這些細胞是否具有各個期該有的功能，我們對這些細胞進行培養(yǎng)，細胞計數(shù)以及做生長曲線，實驗結果表明原成紅細胞可以分裂4次，早期嗜堿性幼紅細胞可以分裂3次，晚期嗜堿性幼紅細胞可以分裂2次，嗜多色性幼紅細胞可以分裂1次，正染色幼紅細胞不能再分裂，這說明我們流式分選得到的各個期

4、的細胞具有了紅系終末分化中個幼稚細胞的有絲分裂能力。
　　我們將這三個標記物運用到正常人的骨髓中，并將人骨髓進行流式細胞分選，我們在正常入骨髓中得到了純度高達90％以上的各個期的細胞。我們將7個正常人骨髓的有核紅細胞進行統(tǒng)計學分析，發(fā)現(xiàn)在正常人的骨髓中，我們得到的成原紅細胞:早期嗜堿性幼紅細胞:晚期嗜堿性幼紅細胞:嗜多色性幼紅細胞:正染色幼紅細胞的比例達到了預測了1∶2∶4∶8∶16。而當我們運用這三個標記物到骨髓異常增生綜合癥的

5、病人身上時，發(fā)現(xiàn)他們骨髓中紅系發(fā)育終末階段的情況發(fā)生了變化。我們在本研究中發(fā)現(xiàn)了建立了穩(wěn)定的紅系體外誘導培養(yǎng)體系，并且發(fā)現(xiàn)了紅系發(fā)育的獨特標記物。該標記物的發(fā)現(xiàn)能讓我們能夠得到大量的不同期的紅系終末發(fā)育的有核紅細胞，以便于讓我們更深層次的對紅細胞的分化和發(fā)育進行研究，也讓我們可以將不同期的有核紅細胞進行RNA測序，DNA測序等方面的分子生物學研究。紅系特異性標記物的發(fā)現(xiàn)也能讓我們將其投入臨床應用中，幫助診斷時期專一性的血液疾病以及跟紅系