HCoV-NL63和HCoV-229E血清IgG抗體ELISA檢測法的建立及初步應用.pdf

1、目的：
　　分別建立人冠狀病毒NL63（Human Coronavirus NL63, HCoV-NL63）和人冠狀病毒229E(Human Coronavirus229E, HCoV-229E）的血清酶聯(lián)免疫吸附檢測法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA），檢測兩種病毒血清IgG抗體，對其在福州地區(qū)兒童和青少年人群中的感染情況進行流行病學調查。
　　方法：
　　分別設計HC

2、oV-NL63核衣殼蛋白基因3’端463bp、HCoV-229E核衣殼蛋白基因3’端514bp片段的引物。擴增這兩個片段并將其克隆到p ET-22b(+)載體上，并轉化到表達宿主大腸桿菌BL21，然后對克隆菌進行鑒定。通過誘導劑誘導蛋白表達，對表達的重組蛋白進行純化、鑒定。以經(jīng)過鑒定的純化重組蛋白為抗原建立血清ELISA法。以此法檢測收集到的442份0-20歲血清標本中兩種病毒抗體，最后對結果進行比較分析。
　　結果：
　　

3、1、442份血清樣本中，HCoV-NL63抗體陽性277份(62.7％)。其中，≤6月嬰兒陽性率50.6%（40/79）；>6～12月嬰兒陽性率67.1%(19/28)；>1～5歲個體陽性率73.1%（125/171）；>5～10歲個體陽性率62.5%（55/88）；>10～20歲個體陽性率50%（38/76）。
　　2、HCoV-229E抗體陽性241份(54.5%)。其中，≤6月嬰兒陽性率49.4%（39/79）；>6～12月

4、嬰兒陽性率64.3%（18/28）；>1～5歲個體陽性率70.8%（121/171）；>5～10歲個體陽性率48.9%（43/88）；>10～20歲個體陽性率26.3%（20/76）。
　　結論：
　　1、成功建立了HCoV-NL63和HCoV-229E血清抗體的ELISA檢測法。
　　2、HCoV-NL63與HCoV-229E是福州地區(qū)兒童和青少年呼吸道感染的常見病原體，不同年齡段的陽性率可能有差異。
　　3、