冠狀病毒HCoV-229E S1蛋白片段的原核表達及鑒定.pdf

1、目的：人冠狀病毒(HCoV-229E)屬Ⅰ型冠狀病毒，是引起人類上呼吸道感染的病原，常引起人的普通感冒。其基因組RNA是一不分節(jié)段的正鏈單股RNA，長約27kb，已知編碼11種蛋白，其中包括4種結(jié)構(gòu)蛋白，分別是刺突蛋白(S)、包膜蛋白(M)、小包膜蛋白(E)和核衣殼蛋白(N)。S蛋白三聚體形成突起，伸出包膜表面，是病毒的主要表面抗原成分，具有受體結(jié)合和膜融合活性，在組織嗜性、細胞融合和毒力等方面起重要作用。S蛋白由S1和S2兩個亞基組成

2、，其中S1形成成熟蛋白的球狀部分，包括受體結(jié)合區(qū)(RBD)和高變區(qū)(HVR)，而S2相對保守，包括一段內(nèi)在的融合肽和兩段疏水的七次重復區(qū)域(HR1和HR2)。這些區(qū)域?qū)τ诓《镜那秩?、細胞與細胞間的融合具有重要意義。 本研究將靶蛋白鎖定為S1蛋白片段(S1417-547位氨基酸)，克隆獲得冠狀病毒HCoV-229ES1基因片段(S1蛋白1249-1642位核苷酸)，在原核表達系統(tǒng)大腸桿菌中獲得高效表達，對表達蛋白加以純化，初步研究

3、其抗原活性。 方法：根據(jù)Genbank提供的HCoV-229E株S基因序列(DQ243973)人工合成冠狀病毒HCoV-229ES1蛋白特異性基因片段，并克隆入pET-21a原核表達載體，構(gòu)建克隆載體pET-21a-S1，通過PCR鑒定。重組載體轉(zhuǎn)化宿主菌BL21(DE3)，經(jīng)IPTG高效誘導表達得到重組蛋白，用金屬螯合親和層析純化，并通過SDS-PAGE電泳及Westernblot對表達的重組蛋白進行鑒定。 結(jié)果：獲得