瘦素在原發(fā)性翼狀胬肉發(fā)病機(jī)制中作用的研究.pdf

1、第一部分：實(shí)驗(yàn)一：
　　 目的:研究原發(fā)性翼狀胬肉和正常球結(jié)膜組織中的Lp和LpR的表達(dá)及差異。
　　 方法:采用免疫組織化學(xué)鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SABC）法檢測(cè)23例原發(fā)性翼狀胬肉組織以及7例正常結(jié)膜組織中Lp和LpR的表達(dá)。
　　 結(jié)果:正常結(jié)膜組織上皮基底細(xì)胞和基質(zhì)層成纖維細(xì)胞Lp中呈弱陽(yáng)性表達(dá)，原發(fā)性翼狀胬肉組織的上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞中Lp 呈陽(yáng)性表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2、正常結(jié)膜組織的上皮層、基質(zhì)層以及原發(fā)性翼狀胬肉組織的上皮層、基質(zhì)層和血管內(nèi)皮細(xì)胞中LpR 蛋白均為陽(yáng)性表達(dá)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:在原發(fā)性翼狀胬肉中Lp 及其特異性受體可能在其發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到一定的作用。
　　 實(shí)驗(yàn)二：
　　 目的:探討原發(fā)性翼狀胬肉組織中Lp，VEGF的表達(dá)，以及它們與CD105抗體所標(biāo)記的微血管密度的相關(guān)性及臨床意義。
　　 方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC 法，檢測(cè)Lp、

3、VEGF和CD105在 23例原發(fā)性翼狀胬肉組織和7例正常球結(jié)膜組織中的表達(dá)，計(jì)數(shù)CD105標(biāo)記的MVD，并采用SPSS11.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:原發(fā)性翼狀胬肉較正常結(jié)膜組織高表達(dá)Lp和VEGF。原發(fā)性翼狀胬肉組織平均MVD 為19.22±6.68，正常結(jié)膜組織平均MVD 4.00±2.15，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。原發(fā)性翼狀胬肉組織中CD105-MVD與Lp的表達(dá)水平成正相關(guān)，與基質(zhì)層VEGF的表達(dá)成正相

4、關(guān)，但與上皮層VEGF的表達(dá)無(wú)相關(guān)性。
　　 結(jié)論:Lp和VEGF在原發(fā)性翼狀胬肉組織新生血管機(jī)制中起到一定的作用。
　　 第二部分：
　　 目的：觀察重組人瘦素（rhLp）對(duì)體外培養(yǎng)HPFs增殖活性的影響并初步探討其可能的機(jī)制。
　　 方法：將HPFs 行體外原代和傳代培養(yǎng)；在培養(yǎng)液中加入不同濃度的rhLp后，CCK8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期情況，Western blot 法觀察增殖細(xì)胞

5、核抗原（PCNA）蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：CCK8 檢測(cè)細(xì)胞增殖提示rhLp 可促進(jìn)HPFs的增殖，有一定的時(shí)間和計(jì)量依賴性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示rhLp 能降低G0/G1 期細(xì)胞比例并提高S 期細(xì)胞比例，Western blot 法檢測(cè)顯示rhLp 促進(jìn)PCNA 蛋白表達(dá)增加具有計(jì)量依賴性。
　　 結(jié)論：本研究結(jié)果顯示，rhLp 可促進(jìn)HPFs 增殖，因此Lp在翼狀胬肉的發(fā)病機(jī)制中可能起到一定的作用。
　　 第

6、三部分：
　　 目的：觀察rhLp 對(duì)HPFs 體外侵襲性生長(zhǎng)的影響，并探討其可能的機(jī)制。
　　 方法：將HPFs 行體外原代和傳代培養(yǎng)；在培養(yǎng)液中加入不同濃度（0,10,100,1000ng/ml）的rhLp 作用12 小時(shí)后，用realtime-PCR檢測(cè)HPFs中MMP2和MMP9 mRNA的表達(dá)，Western blot 法檢測(cè)MMP2和MMP9 蛋白的表達(dá)，用Transwell 小室檢測(cè)HPFs的侵襲能力。

7、r>　　 結(jié)果：realtime-PCR檢測(cè)到僅100ng/ml rhLp 作用HPFs 12h后MMP2、MMP9mRNA的表達(dá)量與對(duì)照組有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Western blot 法檢測(cè)到不同濃度rhLp 作用12h后 MMP2、MMP9 蛋白的表達(dá)量較對(duì)照組有差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。100ng/ml rhLp分別與10，1000ng/ml rhLp 實(shí)驗(yàn)組之間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1000ng/ml rhLp與10ng/m