扶正解毒含藥血清對鎳致癌干預(yù)作用的細(xì)胞分子機制研究.pdf

1、蘭州大學(xué)博士學(xué)位論文扶正解毒含藥血清對鎳致癌干預(yù)作用的細(xì)胞分子機制研究姓名：王婷申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床指導(dǎo)教師：朱玉真20100601量。2 ．將1 6 H B E 細(xì)胞接種于2 5 m l 培養(yǎng)瓶中，每孔接種的細(xì)胞數(shù)為6 x 1 0 6 ，培養(yǎng)2 4 h 后，用N i S ( 1 ．5 ．0 1 u n o l ／L ) 染毒，并用無菌的M E M 、N i S ( 2 ．0 1 1 m o l ／L ) + 不同劑量

2、F J D 含藥血清、空白血清、以及三種抑制劑，磷酸化P 3 8 絲裂原活化蛋白激酶( P 3 8 1 腳K ) 、磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶( P ．E R K ) 、磷酸化氨基未端蛋白激酶( P ．玳K ) 處理細(xì)胞2 4 h ，無菌P B S 洗滌細(xì)胞2 次，胰酶消化后制成細(xì)胞懸液，用聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白免疫印跡雜交( W e s t e r n b l o t ) 法觀察各組細(xì)胞中磷酸化E R K 、P 3 8 和J N

3、K 的表達。3 ．將1 6 H B E 細(xì)胞用無菌的M E M 、不同濃度的N i S ( 1 ．0 - 4 ．0 1 u n o l ／L ) 、N i S ( 2 ．0 I - z m o l ／L ) + F J D 含藥血清( 低、中、高劑量組) 處理細(xì)胞2 4 h 后，用免疫組化法檢測各組細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子( N F ．1 c B )r B 的活性，并進行半定量分析，用R T ．P C R 法測定支氣管上皮細(xì)胞中N F ．r ．

4、B P 6 5的表達。本次實驗采用S P S S l 3 ．0 統(tǒng)計軟件進行相關(guān)分析，多組間比較采用方差分析，兩組之間的比較采用T 檢驗，P < 0 ．0 5 被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1 ．當(dāng)N i S 的濃度為1 - 8 9 m o l ／L 時，細(xì)胞的存活率均低于陰性對照組( M E M 培養(yǎng)液) ，且N i S 的濃度越高。細(xì)胞存活率越低，分別為9 3 ．6 ％、9 2 ．8 ％、9 0 ．3 ％、7 0 ．3 ％；低、中、

5、高劑量F J D 含藥血清和空白血清對1 6 H B E 細(xì)胞均無毒性，細(xì)胞存活率分別為9 9 ．1 ％、9 8 ．8 ％、9 9 ．5 5 ％、9 8 ．7 ％。2 ．N i S 能明顯激活細(xì)胞R O S 、M D A 的表達( 氏0 ．0 5 ) ，N i S 的濃度分別為1 ．0 、2 ．0 、4 ．0 1 9 n o l ／L 時，1 6 H B E 細(xì)胞中R O S 分別為3 1 ．6 8 、3 3 ．2 1 、3 5 ．2

6、6 U ／¨，且存在劑量一效應(yīng)關(guān)系( r - - 0 ．8 1 3 ) ；1 6 H B E 細(xì)胞中M D A 分別為0 ．9 5 1 8 、1 ．0 5 0 3 、1 ．1 6 2 0n m o l ／m l ，且存在劑量一效應(yīng)關(guān)系( r - - 0 ．7 9 2 6 ) 。低、中、高劑量F J D 血清與N i S ( 2 1 a n o l ／L ) 共同處理1 6 H B E 細(xì)胞，R O S 、M D A 活性均低于

7、染鎳組( N i S 為2 1 m a o l ／L ) ，尤其中、高劑量血清組作用顯著( P < o ．0 5 ) ，空白血清對1 6 H B E 細(xì)胞中R O S 、M D A 沒有影響。N i S 能明顯抑制S O D 、G S H ．P x 的活性( 氏0 ．0 5 ) ，N i S 的濃度分別為1 ．O 、2 ．0 、4 ．0 9 m o l ／L時，1 6 H B E 細(xì)胞中S O D 分別為1 1 ．9 9 、7 ．

8、8 9 、5 ．2 4N U ／m l ，且存在劑量一效應(yīng)關(guān)系( F 0 ．8 7 5 ) ；同時1 6 H B E 細(xì)胞中G S H ．P x 分別為2 2 ．6 5 、1 5 ．7 5 、1 0 ．3 8 U ／m l ，且存在劑量一效應(yīng)關(guān)系( 間．8 2 9 ) 。低j 中、高劑量F J D 血清與N i S ( 2 9 m o l ／L )共同處理1 6 H B E 細(xì)胞中，S O D 、G S H - P x 活性均高于染鎳組