腎臟缺血預適應對核因子κB活性及二聚體構成的影響.pdf

1、目的:通過建立大鼠腎臟急性缺血再灌注(I/R)及腎臟缺血預適應(IPC)模型,觀察不同缺血方式后核因子кВ(nuclear factorкВ,NF-кВ)的活性及二聚體構成的異同,初步研究缺血預適應對急性缺血性腎損傷的影響及可能的保護機制。
　　 方法:30只雄性SD大鼠摘除右腎、分離出左腎動脈后隨機均分為3組:A組為假手術組(sham組,n=10),只分離左腎動脈,暴露術野60 min后直接縫合,24 h后取腎;B組為缺血再灌

2、注組(I/R組,n=10),持續(xù)夾閉左腎動脈45 min,恢復血供24 h后取腎;C組為缺血預適應組(IPC組,n=10),左腎動脈夾閉2 min,松開5 min,重復3個循環(huán),余同I/R組。分別用生化和組織學檢查評價腎臟損傷程度,免疫熒光定量分析IKKβ、IL-18的表達,免疫印跡檢測腎臟組織中IKKβ、p65、p50、BCL-3的表達,凝膠電泳遷移率實驗檢測NF-кВ/DNA結合活性,超級遷移率變動試驗NF-кВ二聚體的構成。

3、>　　 結果: Scr水平及腎小管損傷評分提示,I/R組腎臟組織病理改變明顯,損傷程度重,與sham組比較,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01);與I/R組比較,IPC組損傷程度則明顯減輕,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。免疫組織化學染色檢測NGAL的表達提示,IPC組較I/R組明顯表達減少,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。免疫熒光定量分析及免疫印跡檢測IKKB的表達均提示,IPC組較I/R組明顯減少,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.0

4、5)。熒光定量分析檢測IL-18的表達提示,IPC組較I/R組表達減少,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。凝膠遷移率實驗檢測NF-кВ/DNA結合活性提示,IPC組NF-кВ/DNA結合活性較I/R組明顯減低,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。超級遷移率變動試驗提示,IPC組及I/R組NF-кВ二聚體均含有p65及p50。免疫印跡檢測檢測p65的表達提示,p65在I/R組的表達較IPC組高,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。免疫印

5、跡檢測檢測p50的表達提示,p50在IPC組的表達較I/R組升高,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。免疫印跡檢測檢測Bcl-3的表達,Bcl-3在IPC組的表達較I/R組明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 結論:
　　 1、腎臟缺血預適應減少IKKβ的表達,抑制部分NF-кВ/DNA結合活性。
　　 2、腎缺血預適應促進p50/p50同源二聚體活化,減少腎損傷標志物IL-18、NGAL的表達。