人卵巢癌Skov3多細胞團簇耐藥和轉(zhuǎn)移共同相關基因的篩查黏附分子與Skov3多細胞團簇耐藥、轉(zhuǎn)移關系的研究.pdf

1、第一部分: 人卵巢癌Skov3多細胞團簇裸鼠腹腔轉(zhuǎn)移瘤模型的建立 目的：復制人卵巢癌Skov3多細胞團簇(MCAs)裸鼠腹腔移植瘤模型，為研究卵巢癌多細胞耐藥和轉(zhuǎn)移機制提供技術(shù)平臺。方法：用液體重疊培養(yǎng)系統(tǒng)獲得卵巢癌Skov3 MCAs，將細胞團簇懸液注射裸鼠腹腔，動態(tài)觀察裸鼠腹腔情況、成瘤率。H-E染色觀察移植瘤細胞形態(tài)學特征。結(jié)果：Skov3 MCAs注射小鼠腹腔后3周，裸鼠成瘤率為100％。移植瘤細胞形態(tài)保持了原有

2、細胞的特征。移植瘤生長特性、轉(zhuǎn)移方式及腹水形成等與人卵巢癌臨床特征相似。結(jié)論：本成功復制人卵巢癌Skov3 MCAs小鼠腹腔移植瘤模型，該模型模擬了人卵巢癌腹腔播散的生物學行為特征，為研究卵巢癌MCAs轉(zhuǎn)移和耐藥提供了技術(shù)平臺； 第二部分: 基因芯片技術(shù)和SSH技術(shù)篩查Skov3多細胞團簇耐藥和轉(zhuǎn)移的共同 差異基因 目的：以cDNA基因芯片篩查卵巢癌Skov3多細胞團簇耐藥和轉(zhuǎn)移的共同關鍵調(diào)節(jié)基因和相應調(diào)節(jié)靶點：

3、從基因轉(zhuǎn)錄水平分析它們之間的調(diào)控關系；以SSH技術(shù)試圖發(fā)現(xiàn)新的功能基因，進一步從基因轉(zhuǎn)錄水平探索卵巢癌耐藥和轉(zhuǎn)移關系。方法：以Affymetrix u133A2.0基因表達譜芯片篩選Skov3單細胞(A)、MCAs(B)以及MCAs裸鼠腹腔轉(zhuǎn)移瘤(C)cDNA，獲取A vs B組與B vs C組變化趨勢相同基因；SSH：分別獲取標本A、B、C雙鏈cDNA，Rsal酶切，兩輪消減雜交后進行兩次套式PCR擴增，使用斑點雜交技術(shù)對差異表達基因

4、進行驗證。組間比值大于2或小于0.5者，為存在表達差異。 結(jié)果：53個基因在A vs B組與B vs C組顯示相同的變化趨勢，即均為表達升高或均為表達下降。37個基因表達升高，多為細胞粘附、蛋白水解、細胞周期調(diào)控等功能有關的基因；16個基因表達下調(diào)，多與代謝、細胞分化、細胞內(nèi)信號傳導等功能有關；SSH法獲得19條差異表達片斷，A／B組有7條，6條在A組細胞表達增高，1條在B組表達增高；B／C組12條，均在B組表達增高。其中5條為

5、線粒體基因片斷，6條為基因組DNA序列，除了其中g(shù)i|21304291中含有基因KLF4、參與負調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、細胞增值以及中胚層細胞分化調(diào)節(jié)外，其他的5條僅含STS、repeat等結(jié)構(gòu)，功能不明；其他8條多與蛋白折疊、分選、代謝等功能有關； 結(jié)論：卵巢癌MCAs耐藥和轉(zhuǎn)移之間可能有共同的關鍵調(diào)節(jié)基因、相應調(diào)節(jié)靶點和有相同的調(diào)節(jié)機制。細胞粘附、蛋白水解、細胞周期調(diào)控等功能相關基因的上調(diào)，細胞代謝、細胞分化、細胞內(nèi)信號傳導等功能相關基因