納米細(xì)菌培養(yǎng)及其對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)形狀的影響和機制探討.pdf

1、第一部分納米細(xì)菌的培養(yǎng)、收獲與鑒定 目的：探討納米細(xì)菌的培養(yǎng)和收獲方法，檢測培養(yǎng)過程中物質(zhì)消耗情況和生長速度變化，鑒定培養(yǎng)后的納米細(xì)菌。 方法：在納米細(xì)菌的培養(yǎng)過程中，尋找培養(yǎng)的適宜條件，防污染及收獲方法。用全自動生化儀動態(tài)檢測培養(yǎng)上清液中電解質(zhì)和葡萄糖的變化情況。使用酶標(biāo)儀動態(tài)檢測納米細(xì)菌的吸光度值，間接了解其生長速度。通過使用納米細(xì)菌單克隆抗體進行免疫熒光試驗鑒定培養(yǎng)的納米細(xì)菌和利用電鏡進一步觀察其形狀。 結(jié)

2、果：納米細(xì)菌適宜的培養(yǎng)條件是：使用細(xì)胞培養(yǎng)方法，含10％FBS的完全培養(yǎng)基，加入納米細(xì)菌后，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱設(shè)置為37℃，5％C02和95％空氣培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中采用一系列措施可有效地避免納米細(xì)菌污染。培養(yǎng)的納米細(xì)菌用細(xì)胞刮子刮離瓶底，吸入離心管中，4℃離心45分鐘，將細(xì)菌粉末-20℃保存，可以較好地收獲納米細(xì)菌。培養(yǎng)過程中，上清液中的K、Na、Cl、Mg及葡萄糖的濃度無明顯變化(P>0.05)，而Ca、P進行性減少，每周檢測結(jié)果比

3、較差異有顯著性(P<0.05)。納米細(xì)菌吸光度動態(tài)檢測結(jié)果顯示，其吸光度值逐漸增加，每周檢測結(jié)果比較差異有顯著性(P<0.05)。使用免疫熒光的方法檢測時，納米細(xì)菌可發(fā)出綠色熒光，透視電鏡下測量納米細(xì)菌大小為80-300nm。 本文所研究的新型的注塑機注射與預(yù)塑組合回路，是利用交流伺服電機驅(qū)動雙向變量液壓泵，通過改變伺服電機的轉(zhuǎn)速與轉(zhuǎn)向來改變液壓油的壓力，流量及流向，同時針對注塑機注射與預(yù)塑過程是相繼進行的特點，輔以精心設(shè)計的液

4、壓回路，實現(xiàn)兩個動作的組合控制回路。在此基礎(chǔ)上，采用高速高性能的微處理器DSP為核心構(gòu)成控制器，實現(xiàn)其高速，高精度的運動。 全文共分六章： 第一章：介紹注塑機當(dāng)前發(fā)展概況，比較了注塑機當(dāng)前主要的幾種驅(qū)動方式及各自優(yōu)缺點和發(fā)展前景，討論了DSP概況及其在課題中的意義，最后提出本課題的設(shè)計任務(wù)和意義。 第二章：簡單介紹注射與預(yù)塑組合回路的液壓系統(tǒng)及各組成部分，分析其各種工作狀態(tài)下的工作原理，并對該液壓系統(tǒng)特點進行了總

5、結(jié)。 第三章：提出DSP控制器硬件的各項技術(shù)指標(biāo)，介紹控制器總體框架，并討論控制器硬件各子模塊的工作原理及各項技術(shù)指標(biāo)的具體實現(xiàn)。 第四章：簡單介紹TMS320C32的編程特點，DSP控制器軟件概述及各子程序流程圖，PC端上位機程序功能概述及子程序流程圖，最后討論了上下位機通訊協(xié)議及具體通訊工作方式。 第五章：分析本組合回路控制特性，簡述DSP控制器在各個不同的工作狀態(tài)下的控制策略，分析比較各種工況下的實驗數(shù)據(jù)曲

6、線，討論了注射保壓控制過程中的幾個關(guān)鍵技術(shù)問題，并提出解決方案。 第六章：對論文及課程設(shè)計所完成任務(wù)進行了總結(jié)，并對進一步的工作提出了自己的想法。 本課題為浙江大學(xué)一寧波市專項基金項目，研究成果可以為高速、高精度注塑機提供節(jié)能的注射與預(yù)塑組合回路，并易于實現(xiàn)模塊化，為電動／液壓復(fù)合注塑成型機提供配套，且能方便的移植到開合?；芈分校岣邍鴥?nèi)注塑機的技術(shù)含量，縮短與國際先進水平的差距。 第二部分納米細(xì)菌對人臍靜脈內(nèi)皮

7、細(xì)胞生物學(xué)形態(tài)的影響 目的：觀察納米細(xì)菌是否對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞有損傷作用。 方法：光鏡下觀察不同濃度納米細(xì)菌攻擊后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；四唑鹽(MTT)比色試驗檢測被攻擊后細(xì)胞的存活和生長情況；使用免疫熒光染色觀察不同攻擊時間點納米細(xì)菌與內(nèi)皮細(xì)胞的空間位置關(guān)系；流式細(xì)胞儀檢測被攻擊內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：不同濃度納米細(xì)菌攻擊后內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)有不同的變化，極低濃度時無明顯影響，但隨濃度的增加和時間的延長，逐

8、漸出現(xiàn)細(xì)胞變形，輪廓不清，細(xì)胞膜損傷破裂，壞死及脫落，嚴(yán)重時內(nèi)皮細(xì)胞被完全破壞，這種情況隨濃度的增加和時間的延長而更加明顯。比較不同濃度攻擊后同一時間點MTT的值發(fā)現(xiàn)：高濃度攻擊后，活細(xì)胞的存活和生長較低濃度攻擊時受到明顯抑制(P<0.05)。免疫熒光顯示：納米細(xì)菌可以在較短時間內(nèi)侵入到內(nèi)皮細(xì)胞中，隨時間的延長納米細(xì)菌可以不斷進入到細(xì)胞內(nèi)。流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)：在0.5Mcfarland濃度納米細(xì)菌攻擊時各時間點內(nèi)皮細(xì)胞凋亡無明顯差異(P