K5抗血管增生作用結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)和抗Lewis肺癌轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文K5抗血管增生作用結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)和抗Lewis肺癌轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究姓名：蔡衛(wèi)斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：高國全20070528中山大學(xué)博士學(xué)位論文f a c t o r ，V E G F ) 和癌細(xì)胞膜表面表達(dá)趨化因子受體4 [ e h e m o k i n e ( c ．X - C m o t i 0 r e c e p t o r 4 ，c x c a 4 ] 在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移中具有重要意

2、義。V E G F 、C X C R 4 是介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子，二者啟動(dòng)子上同時(shí)具有與缺氧誘導(dǎo)因子( h y p o x i a i n d u c i b l e f a e t o r - Ia l p h a ，H I F ．1 a )結(jié)合的缺氧反應(yīng)元件( h y p o x i a r e s p o n s ee l e m e n t ，H R E ) 。H 1 F ．1 a 長期以來被認(rèn)為是細(xì)胞在缺氧狀態(tài)維持生長所

3、必須，它作為核轉(zhuǎn)錄因子能調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，便細(xì)胞適應(yīng)低氧環(huán)境。最近，有研究發(fā)現(xiàn)H I F ．1 a 還與腫瘤細(xì)胞生長，尤其是轉(zhuǎn)移瘤的生長以及腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。H I F ．1 a 能上調(diào)V E G F 、C X C R 4 等與腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因表達(dá)。H I F - I a 是惡性腫瘤治療潛在靶點(diǎn)，抑制H I F ．1 a 可能是適宜的抗瘤手段。以往研究證實(shí)在微血管內(nèi)皮細(xì)胞K 5 能通過下調(diào)核內(nèi)H I F ．1 a 而抑

4、制V E G F 表達(dá)。K 5 能否通過對(duì)腫瘤細(xì)胞H I F ．i a 信號(hào)調(diào)控途徑的抑制而在腫瘤轉(zhuǎn)移的防治中發(fā)揮潛在的抗瘤活性，尚未有系統(tǒng)研究。綜上所述，本課題擬從三個(gè)方面對(duì)K 5 結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行深入研究：( 1 ) 通過基因工程點(diǎn)突變和缺失突變的方法獲得具有不同空間結(jié)構(gòu)K 5 突變體蛋白，在體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)上比較其活性的差異，闡明K r i n g l e 結(jié)構(gòu)域完整性對(duì)K 5 蛋白抗血管增生活性的影響；( 2 )以高轉(zhuǎn)移性L e w

5、i s 肺癌( L e w i s l u n gc a r c i n o m a ，L L C ) 細(xì)胞為研究對(duì)象，在培養(yǎng)細(xì)胞和腫瘤模型上證明K 5 對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接作用和對(duì)惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用；( 3 ) 從腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵分子C X C R 4 和V E G F 為切入點(diǎn)，揭示核轉(zhuǎn)錄因子H I F ．1 a 在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的重要作用及其對(duì)C X C R 4 和V E G F 的調(diào)控，進(jìn)一步證實(shí)K 5 對(duì)細(xì)胞內(nèi)H I F ．1 a

6、數(shù)量的調(diào)控作用及其機(jī)制。研究目標(biāo)一、總體目標(biāo)：闡明K 5 結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系；確證K 5 蛋白能經(jīng)H I F - l a 信號(hào)調(diào)控系統(tǒng)調(diào)節(jié)C X C R 4和V E G F 表達(dá)影響腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。二、具體目標(biāo)：( 1 ) 通過基因工程點(diǎn)突變和缺失突變的方法闡明K d n g l e 結(jié)構(gòu)域完整性對(duì)K 5 蛋白抗血管增生活性的影響；( 2 ) 體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)證實(shí)K 5 蛋白對(duì)L e w i s 肺癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的抑制作用：( 3 ) 明確趨化因