中國南北食管癌高發(fā)區(qū)患者P16基因甲基化及其表達的比較研究.pdf

1、目的： 食管癌(EC)的發(fā)生發(fā)展是一個多因素作用、多基因參與、多階段發(fā)展的復雜過程，涉及到環(huán)境因素和多種基因的遺傳學和表遺傳學改變。近年來大量研究表明，抑癌基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化作為一種重要的表觀遺傳學改變形式，是繼基因結(jié)構(gòu)變異外的另一種主要的基因失活機制。腫瘤抑制基因p16在多種惡性腫瘤組織中都具有很高的甲基化失活頻率，該基因的異常甲基化在食管癌發(fā)生進展過程中可能扮演重要的角色是本課題研究的出發(fā)點。 全世界食管癌

2、的發(fā)生又具有顯著的地域性分布特征，說明特定的環(huán)境因素肯定起著重要的作用。我國學者徐致祥，譚家駒等提出的“氮循環(huán)”病因假說認為高發(fā)區(qū)可能存在相同的環(huán)境致癌因素是食管癌高發(fā)的主要原因。為此本課題選擇中國最具代表性的南方食管癌高發(fā)區(qū)廣東汕頭、揭陽(南方組)和北方食管癌高發(fā)區(qū)河南鶴壁、林州(北方組)的新鮮食管癌手術(shù)標本，通過檢測南、北兩地食管癌組織中p16基因的甲基化率并加以比較，以期探討p16基因甲基化在兩地食管鱗癌發(fā)生中的作用，篩選食管癌早

3、期診斷和預后的參考標志物，同時從基因表遺傳學機制層面進一步驗證食管癌的“氮循環(huán)”病因假說，在環(huán)境因素和p16基因甲基化的關(guān)系方面為食管癌的發(fā)病機制和食管癌的一級預防提供理論和實驗依據(jù)。 方法： 采用甲基化特異性PCR方法(MSP)分別檢測兩地食管癌組織、癌旁組織和切緣組織p16基因啟動子區(qū)域cpG島甲基化狀態(tài)。采用EnVision免疫組化方法檢測兩地食管癌組織及癌旁組織的p16蛋白的表達。分析p16基因啟動子區(qū)域CpG島

4、甲基化及其表達與食管癌臨床病理學特征的相關(guān)性，比較兩地間癌組織甲基化率和表達率的異同。 結(jié)果： 南方組75例標本中，食管癌組織、癌旁組織和切緣組織p16基因甲基化率分別為 41.3％(31/75)、13.3％(10/75)和6.67％(5/75)。癌組織和癌旁組織p16蛋白的陽性表達率分別為29.3％(22/75)和56.7％(17/30)。31例p16基因甲基化陽性標本中有2例(6.4％)檢測到p16蛋白的表達，而44

5、例p16基因甲基化陰性標本中有20例(45.5％)檢測到p16基因的表達；北方組65例標本中，食管癌組織、癌旁組織、切緣組織p16基因甲基化率分別為52.3％(34/65)、16.9％(11/65)和7.69％(5/65)。食管癌組織和癌旁組織p16蛋白的陽性表達率分別為32.3％(21/65)和66.7％(20/30)。34例p16基因甲基化陽性標本中有5例(14.7％)檢測到p16蛋白的表達，而31例p16基因甲基化陰性標本中有16

6、例(51.6％)檢測到p16基因的表達。兩地組內(nèi)癌組織p16基因甲基化率均顯著高于癌旁組織和切緣組織(P>0.05)。高發(fā)區(qū)兩地相同組織比較p16基因甲基化率和p16蛋白表達率均無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1.p16 基因甲基化是兩地高發(fā)區(qū)食管癌發(fā)生發(fā)展過程中的重要分子事件。 2.p16蛋白表達與p16基因甲基化呈顯著負相關(guān)(P<0.001)。 3.食管癌組織p16基因甲基化及其表達與患者性別

7、、年齡、腫瘤部位無明顯相關(guān)性。與其病理分期、癌組織分化程度存在顯著相關(guān)性，可作為食管癌病情的輔助診斷指標之一。 4.p16基因甲基化可能發(fā)生在食管鱗癌形成的早期，甲基化的過程在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中可能是一個量的積累過程，可作為食管癌早期診斷和切緣復發(fā)的風險標志物。 5.高發(fā)區(qū)兩地相同組織比較p16基因甲基化率和p16蛋白表達率均無顯著性差異(P>0.05)。提示兩個高發(fā)地區(qū)可能具有相似的環(huán)境致癌物質(zhì)，通過相同的p16基因