晉冀豫交界處食管癌死亡率同心圓分布階梯狀減低區(qū)食管癌患者p16基因甲基化比較研究.pdf

1、目的:
　　用p16基因甲基化特異性PCR方法(MSP)研究我國(guó)太行山南段大斷裂晉冀豫交界處食管癌死亡率不規(guī)則同心圓分布階梯狀減低區(qū)五縣（林州市、安陽縣、?？h、滑縣、范縣）食管癌患者p16基因甲基化的情況，比較分析五縣患者中p16基因甲基化的差異，了解其在食管癌發(fā)生發(fā)展中的角色。同時(shí)在環(huán)境因素與遺傳基因改變方面為驗(yàn)證食管癌的“氮循環(huán)-N-亞硝基化合物及其前體物環(huán)境綜合病因假說”提供一些依據(jù)。
　　方法:
　　采用MSP

2、方法分別檢測(cè)五縣食管癌患者癌組織、癌旁組織、切緣組織p16基因甲基化狀態(tài)。分析p16基因甲基化與食管癌臨床病理特征的相關(guān)性，比較五縣相同組織及不同組織之間甲基化陽性率的差異。
　　結(jié)果:
　　五縣（林州市、安陽縣、?？h、滑縣、范縣）各40例食管癌癌組織的p16基因甲基化陽性率分別為60％(24/40)、62.5％(25/40)、52.5％(21/40)、45％(18/40)、45％(18/40);癌旁組織的p16基因甲基化陽

3、性率分別為45％(18/40)、42.5％(17/40)、32.5％(13/40)、22.5％(9/40)、25％（10/40）;切緣組織的p16基因甲基化陽性率分別為22.5％(9/40)、22.5％(9/40)、12.5％(5/40)、10％(4/40)、2.5％(1/40)。各個(gè)縣的組內(nèi)比較，癌組織與切緣組織之間p16基因甲基化陽性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，癌組織與癌旁之間p16基因甲基化陽性率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

4、P＞0.05)。需要特別指出的是，各個(gè)縣的組間比較，切緣組織之間p16基因甲基化陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但是，各個(gè)縣的組間比較，癌組織之間p16基因甲基化陽性率分別比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，癌旁組織之間p16基因甲基化陽性率分別比較差異也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.五縣p16基因甲基化發(fā)生率分別為45％，45％，52.5％，62.5％，60％，說明p16基因甲基化是

5、食管癌發(fā)生發(fā)展過程中頻率較高的分子事件。
　　2.但是，即使在食管癌死亡率最高發(fā)縣患者的食管癌癌組織，p16基因甲基化發(fā)生率也只有60％，說明p16基因甲基化并非食管癌發(fā)生的必經(jīng)事件。
　　3.五縣食管癌患者的癌旁組織、切緣組織均存在一定比例的p16基因甲基化，提示p16基因甲基化可能是食管癌發(fā)生過程中的早期事件。
　　4.在五縣之間切緣組織、癌旁組織、癌組織p16基因甲基化，其程度均隨著食管癌死亡率的增高逐步增高分別

6、為2.5％～22.5％;22.5％～45％;45％～62.5％。不僅如此，五縣之內(nèi)隨著切緣組織、癌旁組織、癌組織的順序，p16基因甲基化率同樣逐步增高，這兩點(diǎn)顯示了癌變甲基化過程伴有數(shù)量的積累過程。
　　5.五縣患者癌組織之間、癌旁組織之間、各個(gè)縣癌組織與癌旁組織之間p16基因甲基化陽性率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。由于癌旁組織距離癌組織僅僅2cm，根據(jù)癌的多點(diǎn)來源學(xué)說，癌旁組織可能已經(jīng)接近癌變，因此癌組織與癌旁組織之

7、間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;說明p16基因甲基化可能是食管癌的一個(gè)分子生物學(xué)特征。
　　6.但是五縣每個(gè)縣患者癌組織與切緣組織之間及總體癌組織與切緣組織之間p16基因甲基化陽性率比較差異均有極為顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　需要說明的是，由于切緣至少距離癌組織5cm以上，有的可達(dá)到7-8cm，幾乎接近于正常組織;每個(gè)縣的癌與切緣之間甲基化陽性率差別等于或小于0.001，五個(gè)縣的甲基化陽性率差別也小于0.01，表明切緣組織

8、幾乎接近正常組織。也因此當(dāng)受到環(huán)境致癌劑的作用時(shí)，會(huì)出現(xiàn)p16基因的甲基化。
　　7.需要特別注意的結(jié)果是，五縣患者切緣組織之間p16基因甲基化陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示五縣環(huán)境中可能存在相似的環(huán)境致癌因素及階梯狀增高的可能，在相應(yīng)的五個(gè)縣，接近正常組織的切緣組織，甲基化陽性率也呈現(xiàn)為階梯狀增高，與項(xiàng)目組的在現(xiàn)場(chǎng)飲用水中兩類前體物檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合，解釋了食管癌死亡率同心圓分布階梯狀變化環(huán)境致癌的物質(zhì)基礎(chǔ)。

9、
　　8.腫瘤發(fā)生部位中食管胸上段癌的p16基因的甲基化陽性率最高，在安陽縣的標(biāo)本中達(dá)到100％(7/7)，在五縣合計(jì)200例標(biāo)本中達(dá)到76％(23/30)，提示導(dǎo)致胸上段癌的致癌劑，可能不同于胸中段和胸下段的致癌劑，符合氮循環(huán)假說關(guān)于40種左右N-亞硝基化合物僅僅引起三個(gè)部位、四種類型食管癌的推論，推斷食管一定部位的癌與食管一定病理類型的癌可能由一定種類的N-亞硝基化合物引起，為現(xiàn)場(chǎng)兩類前體物的尋找提供線索。
　　9.p1

10、6基因甲基化與患者年齡、性別、臨床腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、吸煙飲酒史、家族史均無明顯相關(guān)性。
　　10.本項(xiàng)目是國(guó)家863計(jì)劃《食管癌氮循環(huán)假說及檢驗(yàn)》編號(hào)為“2009AA022421”項(xiàng)目的子課題?？傉n題經(jīng)過多年對(duì)全國(guó)南北高發(fā)區(qū)之間、高低發(fā)區(qū)之間、特別是本項(xiàng)目《晉冀豫交界處食管癌死亡率同心圓分布階梯狀減低區(qū)食管癌患者p16基因甲基化比較研究》，總共400余例食管癌都做了p16基因甲基化，發(fā)現(xiàn)
　　(1)各地患者癌組織之間p1

11、6基因甲基化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，結(jié)合國(guó)內(nèi)外報(bào)告食管癌p16基因甲基化率50％左右，表明p16基因甲基化可能是食管癌組織的一個(gè)分子生物學(xué)特征;
　　(2)本實(shí)驗(yàn)患者標(biāo)本切緣組織之間p16基因甲基化陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，這是以往文獻(xiàn)包括我們總課題組從未報(bào)道過的。
　　綜上提示五縣環(huán)境中可能存在相似的環(huán)境致癌因素及階梯狀增高的可能，與項(xiàng)目組現(xiàn)場(chǎng)飲用水中兩類前體物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合，為氮循環(huán)假說對(duì)食管癌死亡率同心圓