抗體芯片技術在慢性腎臟病患者尿液細胞因子檢測中的應用及意義探討.pdf

1、目的：各種慢性腎臟病進行性發(fā)展的共同結局是終末期腎病(end stage renal disense，ESRD)，ESRD已成為嚴重威脅人類健康的常見病，目前的腎臟替代治療雖然獲得了長足的進步，但是ESRD仍有較高的死亡率，其治療費用已成為嚴重的社會負擔。如何早期發(fā)現(xiàn)慢性腎臟病(Chronic kidneydisenses CKD)并采取有效措施延緩其進展至ESRD，已成為人類面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。CKD慢性進展的實質是腎臟纖維化，研究已經(jīng)證

2、實它與腎臟產(chǎn)生的多種細胞因子、生長因子的作用有關，然而臨床上尚缺乏早期、動態(tài)監(jiān)測腎臟纖維化進程的有效方法。既往研究表明尿液中細胞因子的水平與CKD的發(fā)生、發(fā)展有著十分密切的聯(lián)系，但能否應用尿液中的細胞因子變化譜來動態(tài)監(jiān)測CKD進程仍然是腎病工作者亟需探討的問題。蛋白組學時代的到來以及相關技術的出現(xiàn)，為我們探討此問題提供了嶄新的技術平臺。本研究應用一種全新的蛋白組學技術-抗體芯片(antibody array)技術檢測CKD患者尿液中細胞

3、因子的變化并探討其臨床意義。 材料與方法：選擇7例CKD患者，全部符合美國腎臟病基金會K/DOQI指南中慢性腎臟病的診斷標準，并且有明確的腎臟病理診斷。應用MDRD公式計算GFR水平，并依據(jù)GFR水平，將7例患者分為兩組：I組：GFR≥80ml/min/1.73m<'2>共4例；Ⅱ組：GFR≤40 ml/min/1.73m<'2>共3例。另外，選取3名性別、年齡相匹配的健康志愿者作為正常對照。應用Raybiotech人類細胞因子

4、抗體芯片，依據(jù)試劑盒中操作手冊進行操作，同時檢測各組尿液中細胞因子水平。在此基礎之上，選取2種有表達差異的細胞因子，應用經(jīng)典的ELISA方法進行定量分析，以驗證細胞因子抗體芯片技術的可靠性。 結果：與正常對照組相比，共有15種因子的水平發(fā)生了顯著變化。MCP-1、RANTES、TIMP-1、TNF-α、VEGF、E．selectin、Fas、ICAM-1、IL-2、MMP-2、TGF-β、E-cadhenrin水平同正常對照組相

5、比升高了2-5倍。其中MCP-1、RANTES、TIMP-1、TNF-α和VEGF的水平隨著受損程度加重而進一步升高。而VCAM-1和PDGF-BB的水平同正常對照組相比有下降趨勢。在芯片所包含的2C種細胞因子中MMP-9的水平變化尤其顯著，同正常對照組相比，CKDI組表達水平是正常對照組的492.8倍，CKDII組表達水平是正常對照組的198.7倍。為了驗證檢測結果的可靠性，我們選擇了2種在抗體芯片檢測過程中有明顯差異的細胞因子-MC

6、P-1和TNF-α，然后應用經(jīng)典的ELISA方法進行檢測，并同抗體芯片技術所得結果進行了比較，我們發(fā)現(xiàn)兩種方法檢測結果具有良好的相關性。在檢測MCP-1水平時兩者的相關系數(shù)，值為0.976(p<0.001)，在檢測TNF-α水平時兩者的相關系數(shù)r值為0.939(p<0.001)。 結論：抗體芯片技術能夠高通量、平行性檢測尿液中多種細胞因子的表達水平?？贵w芯片所得到的半定量數(shù)據(jù)能夠真實反應尿液細胞因子的水平?？贵w芯片檢測結果提示C