Compound 48-80對ApoE---小鼠主動脈斑塊的影響及肥大細胞對平滑肌細胞遷移作用的研究.pdf

1、目的:
　　肥大細胞(mast cells,MCs)是一種參與炎癥及免疫應(yīng)答反應(yīng)的細胞。近年來隨著對動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)認識的不斷深入,發(fā)現(xiàn)MCs與AS發(fā)生發(fā)展的各個階段都密切相關(guān)。AS斑塊的細胞成分包括一些炎癥細胞(T淋巴細胞,巨噬細胞,MCs等)和從血管中膜遷移到內(nèi)膜的平滑肌細胞,但是關(guān)于 MCs與平滑肌細胞的關(guān)系并不明確,本實驗以ApoE-/-小鼠為研究對象,復制AS模型,以Compound4

2、8/80和富馬酸酮替芬作為處理因素,研究Compound48/80和富馬酸酮替芬對ApoE-/-小鼠AS斑塊的影響;同時以大鼠主動脈血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)為研究對象,以 MCs作為處理因素,研究MCs對VSMCs遷移的作用,并初步探討其作用機制。
　　方法:
　　30只8周齡雄性ApoE-/-小鼠隨機分為3組:對照組,Compound48/80組和富馬酸酮替芬組

3、。對照組給予普通飼料飼養(yǎng)24周;Compound48/80組給予0.15mg/kg Compound48/80,每周兩次腹腔注射,普通飼料飼養(yǎng)24周;富馬酸酮替芬組:0.1ml/只,每天灌胃一次,普通飼料飼養(yǎng)24周。實驗結(jié)束后處死動物,摘眼球取血,分離血清,采用酶法測定血清脂質(zhì)含量,蘇丹Ⅳ大體染色,小鼠原位灌流固定,取胸主動脈置10％中性緩沖福爾馬林溶液中固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,HE染色;采用改良貼塊法培養(yǎng)大鼠VSMCs,α-smoo

4、th muscle actin鑒定大鼠VSMCs,Compound48/80處理大鼠腹腔MCs后,采用熒光分光光度儀檢測組胺釋放率,甲苯胺藍染色觀察 MCs脫顆粒情況,用 DMEM、DMEM+Compound48/80、MCs、MCs+Compound48/80、Compound48/80刺激的MCs顆粒釋放液、Compound48/80刺激的MCs殘余物、無Compound48/80刺激的MCs顆粒釋放液和無Compound48/80

5、刺激的MCs殘余物與同步化的VSMCs相互作用,Transwell滲透支持系統(tǒng)觀察MCs對VSMCs遷移的影響, FITC標記的鬼筆環(huán)肽觀察VSMCs微絲結(jié)構(gòu)的改變。
　　結(jié)果:
　　1.Compound48/80組,富馬酸酮替芬組和對照組之間的各項血脂含量無明顯差異(P>0.05);蘇丹Ⅳ大體染色結(jié)果顯示:三組胸腹主動脈均有斑塊形成,但Compound48/80組AS病變最為嚴重;HE染色結(jié)果顯示:對照組,富馬酸酮替芬組和

6、Compound48/80組胸主動脈斑塊面積和最大狹窄程度分別為0.51±0.16mm2、0.72±0.15 mm2、1.06±0.18mm2和14±4%、24±7%,34±10%;富馬酸酮替芬組和Compound48/80組的胸主動脈斑塊面積和最大狹窄程度與對照組相比,P<0.05;Compound48/80組的胸主動脈斑塊面積和最大狹窄程度與富馬酸酮替芬組相比,P<0.05。
　　2.Transwell滲透支持系統(tǒng)觀察MCs對

7、VSMCs遷移的影響,結(jié)果顯示:
　　(1)MCs促進VSMCs發(fā)生遷移:MCs組,無Compound48/80作用MCs顆粒釋放液組和無Compound48/80作用的MCs殘余物組分別與DMEM組相比,差異具有顯著性(p<0.05)。
　　(2)Compound48/80刺激的MCs促進 VSMCs發(fā)生遷移,其中MCs的顆粒釋放液是 MCs促進VSMCs遷移的主要原因:MCs+Compound48/80組,Compoun

8、d48/80刺激的MCs的顆粒釋放液組和Compound48/80刺激的MCs的殘余物組與DMEM+Compound48/80組相比,差異具有顯著性(p<0.05);Compound48/80刺激的MCs的顆粒釋放液組和Compound48/80刺激的MCs的殘余物組相比,差異具有顯著性(p<0.05)。
　　3.FITC標記的鬼筆環(huán)肽觀察VSMCs微絲結(jié)構(gòu)的改變,結(jié)果顯示:
　　(1)MCs組與對照組相比,VSMCs微絲纖

9、細,稀疏,熒光強度降低,應(yīng)力纖維部分解聚。
　　(2)MCs顆粒釋放液組的VSMCs微絲明顯變細,稀疏,密度降低,熒光強度明顯降低,細胞外周的應(yīng)力纖維解聚,中央微絲束明顯增加。
　　結(jié)論:
　　(1)Compound48/80和富馬酸酮替芬對ApoE-/-小鼠血脂含量無明顯影響, Compound48/80促進ApoE-/-小鼠的胸主動脈AS斑塊的形成,而富馬酸酮替芬對ApoE-/-小鼠的胸主動脈AS斑塊具有一定抑制作