HRP-3在肝癌組織中上調(diào)表達(dá)的生物學(xué)意義探討.pdf

1、後里大學(xué)博士學(xué)位論文tlRP3在肝癌組織中上調(diào)表達(dá)的生物學(xué)意義探討院系：生全盤鱟堂瞳專業(yè)：垂堡鱟姓名：塾堊莖指導(dǎo)教師：一壑壹垂筮拯一完成日期：2QQ圭!!旦!旦●■●復(fù)旦大學(xué)博士論文中文摘要中文摘要本文以我室已獲得發(fā)明專利授權(quán)的HRP3(Hepatoma—derivedgrowthfactorrelatedprotein3)基因?yàn)檠芯繉ο?，對其功能進(jìn)行了初步的研究。HRP3是HDGF(Hepatoma—derivedgrowthfact

2、or)家族成員之一，它在正常情況下僅主要表達(dá)于人的睪丸，腦和心臟，其他組織中雖然也有表達(dá)，但表達(dá)很少。然而，我們發(fā)現(xiàn)，它在肝癌組織或肝癌細(xì)胞株中高豐度表達(dá)。為了探討其在肝癌中高豐度表達(dá)的生理或病理學(xué)意義，我們用免疫組化方法證實(shí)它確在肝癌細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)，且在肝癌組織內(nèi)的血管或血管區(qū)的豐度最高。同時(shí)，我們用在哺乳動(dòng)物中瞬時(shí)表達(dá)以及細(xì)菌中原核表達(dá)的方法檢測了HRP3是否能像HDGF那樣可以分泌到細(xì)胞外，結(jié)果用HA或GST單克隆抗體在濃縮的培養(yǎng)

3、基上清液中檢測到了HA—HRP3或GSTHRP3融合蛋白，證明它確實(shí)能被分泌或釋放到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中。此外，EGFPHRP3的融合蛋白亞細(xì)胞定位分析結(jié)果又顯示HRP3能定位在核中，這些結(jié)果提示HRP3具有分泌蛋白和核定位蛋白的雙重特性。為了探討HRP一3作為分泌蛋白的功能，我們用原核表達(dá)的HRP3蛋白作為普通培養(yǎng)基的添加物質(zhì)，分別培養(yǎng)成纖維細(xì)胞NIH3T3，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC和肝癌細(xì)胞HepG2，其結(jié)果顯示HRP3蛋白在50—1

4、000ng／mL濃度具有促生長因子的活性，尤其對于HUVEC細(xì)胞的促增殖作用最強(qiáng)，其次是NIH3T3細(xì)胞，對肝癌細(xì)胞也有明顯的促增殖作用。這～結(jié)果提示HRP3在肝癌組織中表達(dá)豐度顯著上調(diào)，在病理學(xué)上具有促進(jìn)瘤體內(nèi)血管生長和肝癌細(xì)胞增殖的意義。基于上述發(fā)現(xiàn)，我們又進(jìn)一步探討了HRP一3促細(xì)胞生長的分子機(jī)制，結(jié)果顯示當(dāng)用501000ng／mL濃度的HRP3重組蛋白作用于NIH3T3細(xì)胞，作用510min，可以使MAPK通路的MEK和ERKl

5、／2蛋白激酶的磷酸化增強(qiáng)，而這種激活作用又能被MEK通路的特異抑制劑PD98059抑制，但對由P38和JNK激酶介導(dǎo)的通路則不受影響。為檢查對MAPK通路的這種激活過程是否具有生理效應(yīng)，我們又用雙熒光素酶報(bào)告反應(yīng)系統(tǒng)分別檢查了MAPK通路下游的應(yīng)答狀態(tài)，結(jié)果顯示，在外源重組蛋白HRP一3加入后的l一4h，SRE和E—box(C—Myc)元件下游的熒光素酶蛋白的表達(dá)增強(qiáng)，從而在分子水平說明HRP一3基因在肝癌中的上調(diào)表達(dá)所產(chǎn)生的促腫瘤生長