2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本研究制備了甘草酸和iPA單克隆抗體,并以單克隆抗體為材料對免疫學技術(shù)中(免疫檢測技術(shù)和基因工程抗體技術(shù))進行了研究。主要結(jié)果如下: (1)制備了甘草酸單抗,效價為2~4×10<'4>,親和常數(shù)為1.00x10<'9>L/mol,抗體為IgGl,輕鏈為к型。以單抗為基礎(chǔ)建立了50%加樣量的icELISA(樣晶占反應體系的體積比為50%),IC50和檢測范圍分別為1.1 ng/mL和0.2 ng/mL~5.1 ng/mL,比Sha

2、n等建立的基于甘草酸單抗的免疫檢測方法靈敏度提高了約20倍。 (2)制備了iPA單抗,效價為1.6~3.2x10<'4>,親和常數(shù)為2.67x10<'9>L/mol,抗體為IgG2a,輕鏈為九型。以單抗為基礎(chǔ)建立了50%(v/v)加樣量的iPA icELISA,IC50和檢測范圍分別為7.1 ng/mL和 1.7 ng/mL~30.5 ng/mL。 (3)在國內(nèi)外首次提出了簡化icELISA,其步驟為:包被,封閉,依次加

3、入游離抗原、酶標二抗和抗體,顯色。與常規(guī)icELISA相比,簡化的icELISA的不同是游離抗原、酶標二抗和抗體同時加入,減少了一個步驟和一次洗板,檢測時間至少減少了30 min。與加樣量相同的常規(guī)icELISA相比,靈敏度提高了1.2~1.4倍。 (4)基于甘草酸和iPA單抗分別建立了簡化icELISA,甘草酸簡化icELISA的IC50和檢測范圍分別是5.3 ng/mL和1.2 ng/mL~23.8 ng/mL,iPA簡化i

4、cELISA的IC50和檢測范圍分別是21.2ng/mL和2.8 ng/mL~161.6 ng/mL。與加樣量相同的常規(guī)icELISA相比,甘草酸icELISA的靈敏度提高了1.02倍:iPA icELISA的靈敏度提高了1.4倍。 (5)將膠體金免疫檢測試紙條應用于中草藥真?zhèn)魏推焚|(zhì)鑒定?;诟什菟釂慰菇⒘烁什菟崦庖邫z測試紙條,檢測極限均為20 ng/mL~50 ng/mL。10 mg甘草樣品用5 mL水提取30 min,直接

5、用試紙條測定上清液可區(qū)別真?zhèn)胃什?;上清液稀?00倍,用試紙條可區(qū)分出多年生與一、兩年生栽培甘草根。 (6)對iPA基岡工程抗體進行了研究。從分泌iPA單抗的雜交瘤細胞中提取了總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到了cDNA。以cDNA為模板克隆了抗體VH和VL基因,通過SOE-PCR將VH基因、VL基因和linker連接獲得了scFv基因。構(gòu)建了iPA scFv的原核表達載體,并在大腸桿菌中進行了表達。構(gòu)建了真核表達載體,并轉(zhuǎn)化煙草,獲得了有草

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