羥基化酶HmtN和硫酯酶SgcE10的初步晶體學(xué)分析.pdf

1、抗生素是醫(yī)藥行業(yè)中使用極為普遍的藥物，在人類健康、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、漁業(yè)等行業(yè)中都有廣泛的應(yīng)用。已發(fā)現(xiàn)的抗生素大多是由鏈霉菌產(chǎn)生的，屬于其次生代謝產(chǎn)物。黑莫他丁和力達(dá)霉素是不同種鏈霉菌產(chǎn)生的抗生素，它們不僅具有抗菌活性，還具有一定的抗癌活性。雖然現(xiàn)階段它們還沒有實(shí)際的應(yīng)用，但是對(duì)它們的研究已經(jīng)越來越深入。HmtN和SgcE10是這兩類抗生素生物合成中比較重要的酶：HmtN是羥基化酶，負(fù)責(zé)黑莫他丁羥基哌嗪酸殘基C-3位上γ-羥基基團(tuán)的結(jié)合，形

2、成黑莫他丁單體；SgcE10是硫酯酶，可能負(fù)責(zé)力達(dá)霉素核心結(jié)構(gòu)的合成。同源序列比對(duì)顯示，HmtN屬于細(xì)胞色素P450家族蛋白，SgcE10屬于Hot-dog家族蛋白。
　　在本研究中，基因hmtN和sgcE10被連接在載體pET28a上構(gòu)建新的載體，然后將構(gòu)建的載體分別轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中，并誘導(dǎo)它們異源表達(dá)，隨后通過親和層析、凝膠層析等步驟，獲得了大量高純度的蛋白質(zhì)HmtN和SgcE10。接著，通過多種結(jié)

3、晶試劑盒的篩選和部分條件的優(yōu)化，得到了可用于X-射線衍射的晶體，通過衍射得到數(shù)據(jù)，然后運(yùn)用一系列晶體學(xué)軟件處理，最后獲得了兩種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)。HmtN晶體的最高分辨率為2.36?，空間群為P212121，晶胞參數(shù)為a=56.14，b=72.29，c=103.29，α=β=γ=90.00，HmtN的結(jié)構(gòu)為單體。SgcE10晶體的最高分辨率為2.90?，空間群為P1211，晶胞參數(shù)為a=58.47，b=182.32，c=61.38，α=9