SET-TAF-Iβ和CHMP6的克隆、表達、純化以及初步晶體學分析.pdf

1、在真核細胞中，所有的基因組DNA與高度進化保守的堿性蛋白一組蛋白以及多種組蛋白相關染色質因子組裝構成核小體結構，重復的核小體結構組成染色質結構。染色質結構會影響到多種參與基因調控的酶以及因子與DNA的相互作用。因此染色質結構的維持與調節(jié)對于真核細胞基因調控是至關重要的環(huán)節(jié)。染色質結構的改變主要依賴于組蛋白的修飾以及構象改變，所以組蛋白分子伴侶是參與組蛋白修飾調控重要的因子之一。
　　 組蛋白分子伴侶SET也被稱為模板活化因子te

2、mplate activating factorⅠβ(TAF-Ⅰβ)，由set基因所編碼。該基因最初是在急性非分化白血病(AUL)中被鑒定，因為發(fā)生基因易位而與can基因形成融合基因。SET/TAF-Ⅰβ屬于核小體組裝蛋白(NAP)家族。隨后的一系列功能試驗結果顯示，SET/TAF-Ⅰβ是一個具有多種功能的蛋白質，它可以參與到眾多的生理途徑：包括組蛋白結合，核小體組裝，DNA復制、轉錄激活以及凋亡等等。生化試驗結果表明，SET/TAF-

3、Ⅰβ含有一個位于羧基末端的酸性結構域(acidic domain)。只有在含有酸性結構域的情況下，SET/TAF-Ⅰβ才具有結合H2A-H2B組蛋白以及抑制組蛋白乙酰化的活性。
　　 已經被分離的十類組蛋白分子伴侶的一級結構具有高度的多樣性。由于對它們的四級結構的了解甚少，故而對結構與功能的關系研究還未統一。最近基于結構與功能的研究顯示組蛋白分子伴侶之間的相似性與差異性，為深入了解組蛋白組裝與分解的機理提供了基礎。目前人源的SE

4、T/TAF-Ⅰβ的完整結構還一直未被解析，為了詳細了解SET/TAF-Ⅰβ的結構以及作用機理，我們克隆，表達以及純化了截去氨基末端的22個氨基酸殘基并具有羧基末端的酸性結構域的人源SET/TAF-Ⅰβ蛋白，采用懸滴氣相擴散法，獲得了具有良好X射線衍射能力的人源SET/TAF-Ⅰβ蛋白晶體，并成功收集一套衍射分辨率為2.7A的晶體衍射數據，初步晶體學分析顯示SET/TAF-Ⅰβ晶體屬于P43212空間群。
　　 囊泡轉運分類內涵體

5、(ESCRT)是參與調控跨膜蛋白質下調以及降解過程的一類重要復合物。其生物學功能的發(fā)揮，依賴于胞內相應的各個亞基間的相互協調而構成了一個復雜而精確的調控體系。生化實驗研究表明ESCRT復合體由三個亞復合體組成，分別命名為ESCRT-Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ。已有許多學者對ESCRT復合體及其相關蛋白質做了深入的研究工作并做出相關報道，但是具體的作用機制目前仍不甚清楚。對其結構的研究將為人們探索跨膜蛋白的降解機制提供重要基礎。我們的工作主要集中于ESC

6、RT-Ⅲ中CHMP6亞基各個結構域的結構生物學研究。本論文研究計劃中，已經順利完成了整個課題的前期工作，包括CHMP6人工嵌合蛋白的構建、表達、純化、晶體生長條件的篩選。
　　 本文簡要介紹了CHMP6蛋白作為囊泡轉運分類復合體亞單位的生物學功能，并對它與相關蛋白的同源性及保守性進行了一些討論。文章中較為細致地討論了整個實驗的設計，材料與方法，操作過程及其遇到的問題與相應的解決方案，最后闡述了現階段已取得的實驗進展，對實驗結果做