M2b型白血病基因產(chǎn)物靶向治療初探RIG K晶體學(xué)研究及SET DOMAIN初步純化.pdf

1、該文主要是對AML1-ETO融合蛋白各功能域進(jìn)行了克隆、表達(dá)、純化,其中融合蛋白中ETO部分的NHR3功能域及NHR3-4功能域(即NHR3+MYND)目前已獲得了蛋白晶體,為進(jìn)一步解析其結(jié)構(gòu)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ).在NHR3-4蛋白的純化過程中,發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了該區(qū)域的兩個生化特性,即能與大腸桿菌中的DNA結(jié)合,并能介導(dǎo)NHR3-4二聚體的形成.隨后對DNA進(jìn)行了克隆、測序及生物信息學(xué)分析.由于NHR3-4是由NHR3和MYND兩功能域組成,那

2、么這兩功能域在NHR3-4與核酸結(jié)合及介導(dǎo)二聚體中又起什么作用呢?通過對這兩功能域蛋白進(jìn)行的陰離子交換層析后發(fā)現(xiàn)經(jīng)Mono Q之后的NHR3蛋白在高鹽洗脫后出現(xiàn)一小峰,核酸電泳證實(shí)其為核酸,而MYND蛋白在經(jīng)ResourceQ之后在高鹽洗脫時(shí)并未發(fā)現(xiàn)有小峰.這也提示NHR3-4功能域與核酸結(jié)合可能是以NHR3這一功能域?yàn)橹鞫閷?dǎo)的.通過對NHR3蛋白進(jìn)行的Superdex75分子篩層析、動態(tài)光散射分析、非變性凝膠電泳及晶體電泳,已經(jīng)證實(shí)

3、了NHR3功能域單獨(dú)存在時(shí)主要以四聚體形式為主.而MYND功能域是否介導(dǎo)聚合體,目前正在研究之中.綜上所述,目前我們已獲得NHR3功能域、NHR3-4功能域的蛋白晶體,進(jìn)一步的晶體優(yōu)化工作正在開展,這兩個晶體迄今為止未見報(bào)道.在NHR3-4功能域純化過程中發(fā)現(xiàn)了這一段區(qū)域的兩個新的生化特性,進(jìn)一步的生物學(xué)功能有待研究. 此外,該文對維甲酸調(diào)控蛋白RIG K進(jìn)行了純化及晶體學(xué)初步研究.RIG-K為ATRA誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化過程中的調(diào)變基因

4、.該實(shí)驗(yàn)室對其功能進(jìn)行了大量的探討,結(jié)合國際上相關(guān)研究進(jìn)展,目前認(rèn)為RIG-K是通過影響α-actinin細(xì)胞骨架的裝配及整合素信號通路的傳導(dǎo)而在ATRA誘導(dǎo)APL細(xì)胞分化的過程中發(fā)揮作用.該文主要試圖從其蛋白結(jié)構(gòu)角度進(jìn)行探討,期望能對其功能有較深的了解,以便更好地幫助我們理解維甲酸誘導(dǎo)APL分化的分子機(jī)制.現(xiàn)在我們已獲得大量高純度的RIG-K蛋白,并進(jìn)行了晶體初篩,已在幾個條件下長出了晶體.最后,該文對該實(shí)驗(yàn)室從人類CD34<'+>干