轉(zhuǎn)錄因子PAX5-BSAP在兒童白血病細胞中表達特性的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學碩士學位論文轉(zhuǎn)錄因子PAX5BSAP在兒童白血病細胞中表達特性的研究姓名：張蓓申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：沈立松20040401相對表達量分別為235％和252％；而在T一和髓系細胞株中幾乎不表達。本研究中所建立的實時定量RT—PCR是種簡單、快速、方便的方法，可迸一步用于更多I臨床不同Jf[L液惡性腫瘤樣本的觀察研究。第二部分WesternBlotting分析血液腫瘤細胞BSAP表達水平為了觀察血液

2、腫瘤細胞中BSAP蛋白質(zhì)表達水平，初步探討其與PAX5mRNA表達水平之間的關(guān)系。采用WesternBlotting分析了6個血液腫瘤細胞株和4個臨床樣本(包括2例BALL，l例TALL和1例AML)中BSAP表達水平。本研究的免疫印跡實驗運用特殊的蛋白提取試劑提取細胞總蛋白，經(jīng)SDS—PAGE電泳、電轉(zhuǎn)移，與針對BSAP的單抗及HRP標記的二抗反應(yīng)，最后采用化學發(fā)光法顯色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在B系細胞中檢測到一52KD的BSAP條帶，但在T一

3、和髓系細胞中為陰性；且BSAP條帶的深淺與運用實時定量RT—PCR檢測到的PAX5mRNA表達量高低具有一致性，因此認為PAX5mRNA表達水平與BSAP蛋白表達水平相一致。第三部分PAX5mRNA表達與兒童急性白血病的相關(guān)性研究為了進一步了解急性白血病中PAX5mRNA的表達特性，初步分析探討PAX5基因表達與各臨床或?qū)嶒炇抑笜酥g的關(guān)系，本研究運用實時定量RT—PCR測定了6例正常兒童、58例初發(fā)和4例復(fù)發(fā)急性白血病兒童(其中包括3

4、9例BALL，10例TALL和13例AML)骨髓細胞中PAX5mRNA的表達水平。結(jié)果顯示，BALL組比TALL組和AML組的PAX5mRNA表達高(P=O02q和P=O013)，而與正常對照組之間無統(tǒng)計學差異。TALL組和AML組的PAX5mRNA表達水平均低于正常對照組，而TALL組與AML組之間的表達無差異。在BALL患兒中，PAX5mRNA表達的個體差異很大。在BALL的不同臨床危險度分組中，PAX5mRNA高表達的患兒主要分布

5、于中危組中。PAX5在Pre—B和CAIL這二個BALL亞型中的表達無顯著性差異。此外還發(fā)現(xiàn)，初發(fā)治療前組和復(fù)發(fā)組的BALL患兒PAX5mRNA表達高于化療完全緩解組(P=O011和P=O006)。由于在CDl9基因的啟動子上有BSAP的結(jié)合位點，本研究發(fā)現(xiàn)在BALL中PAX5表達水平與同樣用實時定量RT—PCR檢測的CDl9表達水平之間存在明顯的相關(guān)性，提示：PAX5可能參與CDl9表達調(diào)控。綜上所述，運用實時定量RT—PCR方法能快