熊果酸誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HHUA凋亡的研究.pdf

1、目的： 觀察熊果酸誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HHUA凋亡并探討其誘導(dǎo)凋亡的途徑及機(jī)制。 方法： 將不同濃度的熊果酸加入到培養(yǎng)液中與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HHUA共孵育。用四甲基偶氮唑藍(lán)還原反應(yīng)(MTT法)測(cè)定熊果酸在不同濃度下對(duì)HHuA細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)，通過(guò)丫錠橙熒光染色從形態(tài)學(xué)上觀察熊果酸誘導(dǎo)HHCA細(xì)胞凋亡的情況，應(yīng)用流式細(xì)胞儀分別測(cè)定熊果酸在不同濃度下對(duì)HHUA細(xì)胞周期的阻滯作用及誘導(dǎo)該細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用，并利用RT-

2、PCR和細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)基因caspase-3和bcl-2表達(dá)的相應(yīng)變化來(lái)研究熊果酸誘導(dǎo)HHUA細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能機(jī)理。所得數(shù)據(jù)使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。 結(jié)果： MTT法顯示熊果酸在體外對(duì)}{HUA細(xì)胞有增殖抑制效應(yīng)，30μmol/L的熊果酸在作用24h后即表現(xiàn)較強(qiáng)的增殖抑制作用，且呈明顯的濃度和時(shí)間依賴性；在熊果酸作用后，經(jīng)丫錠橙染色，熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)細(xì)胞核皺縮，呈濃染的塊狀或顆粒狀，發(fā)出致密

3、的熒光，在核膜邊緣可見(jiàn)明顯的凋亡小體。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示40μmol/LUA作用24h后HHUA細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)G0/G1期阻滯，S期細(xì)胞比例降低，與對(duì)照組相比開(kāi)始呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨著熊果酸濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞周期的改變愈加明顯，凋亡率逐漸增高；RT-PCR顯示，隨藥物濃度升高，caspase-3mRNA表達(dá)增強(qiáng)而bcl-2mRNA表達(dá)減弱。細(xì)胞免疫化學(xué)法可見(jiàn)，隨著熊果酸濃度的升高及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，caspase-3