幾丁質(zhì)合成抑制劑與小牛胸腺DNA相互作用研究.pdf

1、我國作為農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)藥的大量使用引起的環(huán)境殘留問題已日趨嚴(yán)重。幾丁質(zhì)合成抑制劑作為“二十一世紀(jì)”新型高效低毒農(nóng)藥得到了廣泛使用，由于其高疏水性和難降解導(dǎo)致其在農(nóng)藥施用周邊的環(huán)境中均有殘留檢出。同時，該類農(nóng)藥還可能通過各種途徑在食物鏈中富集，進(jìn)而引起非靶標(biāo)生物出現(xiàn)不良生物效應(yīng)，表現(xiàn)為畸形率升高、產(chǎn)卵率和存活率降低等。DNA作為生物體重要的遺傳物質(zhì)，外源化合物經(jīng)過體內(nèi)吸收可能會對其產(chǎn)生不利影響，如基因突變、染色體畸變、鏈斷裂等，遺傳物質(zhì)的這

2、些改變會對生物體產(chǎn)生重大影響。因此，研究幾丁質(zhì)合成抑制劑與DNA的相互作用具有十分重要的意義。
　　本文利用紫外-可見分光光譜、熒光光譜分析技術(shù)，測定了八種苯甲酰脲類農(nóng)藥（伏蟲脲、伏蟲隆、雙三氟蟲脲、氟鈴脲、虱螨脲、氟酰脲、氟啶脲和氟蟲脲）以及一種噻二嗪類藥物（噻嗪酮）與小牛胸腺DNA（ctDNA）之間的結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)，判斷藥物與ctDNA之間作用模式和作用力類型，從分子水平探討幾丁質(zhì)合成抑制劑中化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用模式的相關(guān)性，

3、為環(huán)境暴露該類藥物的非靶標(biāo)生物遺傳毒性風(fēng)險評價提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本文的主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1.在pH7.4生理?xiàng)l件下，利用紫外光譜、熒光光譜分析技術(shù)，測定了8種苯甲酰脲類殺蟲劑與ctDNA間的相互作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)含有不同取代基的藥物與ctDNA結(jié)合能力隨N-苯基芳環(huán)上取代基長度的增加而降低，其中氯氟取代苯甲酰脲類結(jié)合能力最高，氯氟烷氧基取代苯甲?；惔沃确窖趸?吡啶氧基苯甲酰脲類則較低。通過計算藥物與ctDN

4、A間相互作用的熱力學(xué)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)苯甲酰脲類殺蟲劑與ctDNA間相互作用主要依靠氫鍵和范德華力。
　　2.通過DNA熔點(diǎn)測試、KI猝滅和鹽效應(yīng)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探討了不同取代基藥物與ctDNA間的作用模式。其中伏蟲隆、伏蟲脲和氟鈴脲三種藥物以嵌插的方式與ctDNA結(jié)合，氟酰脲和氟蟲脲以溝槽的方式與ctDNA結(jié)合，虱螨脲以靜電的方式與ctDNA結(jié)合，而雙三氟蟲脲和氟啶脲均同時存在兩種與ctDNA結(jié)合的方式，雙三氟蟲脲為嵌插和溝槽作用，氟啶脲則

5、為溝槽和靜電作用。
　　3.以亞甲基藍(lán)（MB）為分子探針，通過紫外、熒光光譜法研究生理?xiàng)l件下噻嗪酮與ctDNA結(jié)合模式，同時選取與DNA結(jié)合強(qiáng)度不同的四種典型金屬離子（Cd2+、Co2+、Cu2+、Ni2+），探討重金屬對噻嗪酮與ctDNA結(jié)合作用的影響機(jī)制。結(jié)果表明噻嗪酮可以以嵌插方式與ctDNA結(jié)合，金屬離子的存在不會影響噻嗪酮與ctDNA之間的作用模式，但少量Cu2+、Ni2+可能會協(xié)助噻嗪酮與ctDNA的作用，使結(jié)合常數(shù)呈