鴨α-干擾素核酸疫苗在鴨體內(nèi)的動態(tài)分布及表達產(chǎn)物抗鴨瘟強毒效果初探.pdf

1、28日齡北京鴨分別通過肌肉注射50μg、100μg和200μg和基因槍轟擊免疫1μg、3μg和6μg鴨α-干擾素核酸疫苗(pcDNA-SDIFN-α)，同時設PBS和空載體pcDNA3.1(+)對照。免疫后不同時間分別采集鴨的血清以及全血和各部分組織(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、法氏囊、胸腺、哈氏腺、胰臟、十二指腸、空腸、回腸、直腸、盲腸、腦和免疫注射部位的組織)。進行如下研究：①建立一種能檢測pcDNA-SDIFN-α的實時熒光定量

2、PCR(FQ-PCR)方法，并應用于pcDNA-SDIHN-α在免疫鴨體內(nèi)動態(tài)分布的檢測。②pcDNA-SDIFN-α經(jīng)不同劑量不同途徑免疫鴨的體內(nèi)表達產(chǎn)物(免疫血清)抗鴨瘟強毒致鴨成纖維細胞病變的能力。獲得的結果如下： 1．建立的檢測pcDNA-SDIFN-α的FQ-PCR方法具有良好的特異性，重復性好，檢測的線性范圍寬，能檢測到7.7×10<'1>～7.7×10<'9>copies/μL，可用于對鴨體內(nèi)的pcDNA-SDIF

3、N-α進行定量檢測。 2．通過肌肉注射和基因槍轟擊免疫鴨的各組織中均在免疫后1h檢測到pcDNA-SDIFN-α的分布，且含量最高的組織均是在免疫注射部位，其中肌肉注射免疫50μg、100μg和200μg組中最高拷貝數(shù)分別為9.1×10<'7>copies/g、1.48×10<'8>copies/g和1.78x10<'8>；基因槍免疫1μg、3μg和6μg組中最高拷貝數(shù)分別為1.0x10<'8>copies/g、2.51×10<

4、'8>copies/g和3.02×10<'8>copies/g。肌肉注射免疫與基因槍轟擊免疫均是良好的免疫方式。 3．除血液外，隨著免疫時間的推移，pcDNA-SDIFN-α組織中的含量達到最高后呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢，免疫后前7d期間減少最明顯。210d除部分組織外，依然能夠檢測到核酸疫苗的存在，但含量很低，每克組織中pcDNA-SDIFN-α拷貝數(shù)僅有10<'1>左右。全血中的pcDNA-SDIFN-α含量一直較低，在1h-10

5、5d時，總體也呈減少趨勢，但拷貝數(shù)變化差異不顯著(P>0.05)；210d時與其他組織中的含量差異不顯著(P>0.05)。在整個檢測時間段，免疫部位pcDNA-SDIFN-α的含量減少的最多，減少了約6-7個數(shù)量級，其它組織中的含量也減少了約2.5個數(shù)量級。 4．不同劑量肌肉注射免疫組與基因槍轟擊免疫組各組織器官中pcDNA-SDIFN-α的含量呈現(xiàn)的總體規(guī)律為：肌肉組：200μg組>100μg組>50μg組；基因槍組：6μg組

6、>3μg組>1μg組，但差異均不顯著(P>0.05)。 5．PBS對照和空載體pcDNA3.1(+)對照組的各組織器官所有時間點均未檢測到pcDNA-SDIFN-α。 6．在免疫后1d-63d，表達產(chǎn)物作用于鴨胚成纖維細胞后，pcDNA-SDIFN-α試驗組的鴨瘟病毒的含量均低于PBS和空載體對照組的病毒含量，且在免疫后3d到21d時的表達產(chǎn)物作用后，DPV病毒含量比對照組的減少最多，表明在免疫后3d到21d時的表達產(chǎn)物

7、抑制病毒的能力最明顯，最高抑制病毒量約10<'8>copies/100μL細胞中。肌肉注射組在7d時的表達產(chǎn)物有最高的抑制鴨瘟強毒的能力，基因槍免疫組在3d時的表達產(chǎn)物抑制鴨瘟強毒的能力最強。 7．不同劑量肌肉注射免疫組與基因槍轟擊免疫組表達產(chǎn)物抑制病毒能力：肌肉組：200μg組>100μg組>50μg組；基因槍組：6μg組>3μg組>1μg組。表明以相同的免疫方式核酸疫苗的表達產(chǎn)物量與注射劑量呈現(xiàn)正相關。 8．200μ