VC和VE對(duì)鉬暴露雌鼠生殖功能損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:鉬（Mo）廣泛存在于自然界中，同時(shí)又是動(dòng)物機(jī)體正常生命活動(dòng)所必須的微量元素。而過多的攝入鉬，則會(huì)導(dǎo)致組織損傷及功能改變。本研究通過將雌性小鼠暴露于不同鉬濃度下來構(gòu)建生殖損傷模型，觀察鉬對(duì)卵巢組織及卵細(xì)胞的影響，闡明維生素 C、E對(duì)鉬暴露小鼠生殖功能損傷保護(hù)作用的機(jī)制，為治療鉬暴露小鼠引起的生殖功能損傷提供參考依據(jù)。
　　方法:1.鉬對(duì)小鼠附植前胚胎體外發(fā)育的影響：受精卵由性成熟的昆明雌鼠獲得，然后分別在鉬濃度為0、5、10、

2、20、40、80、120、160μg/mL的8個(gè)KSOM液中培養(yǎng)5d直到發(fā)育至囊胚中期。在倒置顯微鏡下觀察胚胎的發(fā)育情況。最后將各組發(fā)育至囊胚的胚胎分別移植到不同的假孕小鼠體內(nèi)，記錄小鼠出生率。2.鉬對(duì)小鼠卵巢功能的影響：將 ICR株成年雌性小鼠分為5組，分別通過飲水進(jìn)行鉬暴露，飲水中鉬濃度為0、5、10、20、40μg/mL。14d后，獲取小鼠的 MⅡ期卵母細(xì)胞和卵巢組織，以 MⅡ期卵母細(xì)胞的總數(shù)和畸形率，卵巢指數(shù)，卵巢超微結(jié)構(gòu)變化，

3、卵巢抗氧化酶即超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛的水平來評(píng)估鉬對(duì)卵巢功能的影響。3.鉬對(duì)小鼠血液和卵巢組織中微量元素的影響：收集鉬濃度為0、20、40μg/mL組小鼠的血液和卵巢，并測(cè)量其鉬、銅、鐵、鋅和錳的含量。4.維生素 C、E對(duì)鉬致雌性小鼠生殖毒性的治療：實(shí)驗(yàn)分為五組分別為Water+Oil即陰性對(duì)照組，Mo+Oil即陽(yáng)性對(duì)照組，Mo+VC+Oil組即VC組Mo+VE+Oil即VE組，Mo+VC+VE+

4、Oil即VC+VE組。通過飲水鉬暴露，濃度均為40μg/mL，14d后用維生素C或/和維生素 E治療7d。收集小鼠 MⅡ期卵母細(xì)胞和卵巢，觀察卵細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，記錄相關(guān)的卵巢參數(shù)并檢測(cè)卵巢相應(yīng)的生化指標(biāo)情況。評(píng)估維生素 C、E的治療效果。
　　結(jié)果:1.鉬對(duì)小鼠附植前胚胎體外發(fā)育的影響：當(dāng)鉬濃度≤10μg/mL時(shí)，鉬不會(huì)顯著影響胚胎質(zhì)量。培養(yǎng)液中鉬濃度≤20μg/mL時(shí)不會(huì)影響囊胚和出生率。鉬濃度≥40μg/mL時(shí)顯著降低了分裂率，

5、囊胚率，出生率和細(xì)胞平均數(shù)，顯著提高了囊胚退化的比例。鉬為120μg/mL時(shí)抑制囊胚到出生期間的發(fā)育。鉬為160μg/mL時(shí)導(dǎo)致胚胎全部發(fā)育停滯（最多發(fā)育至16-細(xì)胞）并且伴隨有大量的退化。2.鉬對(duì)小鼠卵巢功能的影響：與對(duì)照組相比，鉬濃度為5μg/mL時(shí)，MⅡ期卵母細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，卵巢指數(shù)，排卵情況均有所提高；而40μg/mL時(shí)則產(chǎn)生不利的影響。當(dāng)鉬濃度≥20μg/mL時(shí)，卵巢內(nèi)卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞中的線粒體會(huì)有一定程度的損傷，同時(shí)在超微

6、結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)有病理變化。鉬濃度20μg/mL和40μg/mL組與對(duì)照組相比，卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中含有相對(duì)較少的細(xì)胞器，以及體積較小、形態(tài)異常、腫脹且嵴變形的線粒體。卵巢內(nèi)卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞的線粒體受損，出現(xiàn)空泡化、輕度腫脹、嵴消失和膜的完整性缺失的現(xiàn)象。卵巢中的所有這些變化，都是伴隨著超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性以及丙二醛（MDA）水平的變化而變化。3.鉬對(duì)小鼠血液和卵巢組織中微量元素的影響：小鼠卵巢和血液中的鉬含量均極顯著地增加

7、，與此同時(shí)，Zn、Fe、Mn的含量均有極顯著的下降。當(dāng)鉬濃度≥40μg/mL時(shí)，能顯著降低卵巢中 Cu、Zn、Mn的含量。4.維生素 C、E對(duì)鉬致雌性小鼠生殖毒性的緩解作用：小鼠在40μg/mL的低鉬暴露后，再分別用適量的VC，VE及VC和VE經(jīng)口治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)小鼠卵巢的氧化損傷有一定的保護(hù)作用。
　　結(jié)論:1.鉬對(duì)胚胎發(fā)育是否產(chǎn)生的不利影響是由劑量大小決定。較低劑量（≤20μg/mL）時(shí)，小鼠胚胎沒有明顯的損傷。高劑量時(shí)（≥4

8、0μg/mL），胚胎質(zhì)量顯著降低。2.鉬通過調(diào)節(jié)卵巢的氧化應(yīng)激而影響卵母細(xì)胞質(zhì)量的情況主要取決于鉬劑量的大小。特別是在濃度適合的時(shí)候，鉬能夠提高卵巢的功能。所以，鉬或許能作為一個(gè)用于治療女性不孕癥的新型候選藥物。3.鉬可以在小鼠卵巢中沉積，且與Zn、Fe、Mn之間存在拮抗關(guān)系。當(dāng)鉬濃度≥40μg/mL時(shí)，卵巢中Cu、Zn、Mn的缺乏，導(dǎo)致Cu-Zn SOD和Mn SOD活性的減弱，進(jìn)而產(chǎn)生了細(xì)胞損傷。4. VC、VE對(duì)鉬造成的小鼠卵巢的