力達(dá)霉素輔基蛋白對(duì)腫瘤組織細(xì)胞的結(jié)合作用研究.pdf

1、力達(dá)霉素是由一個(gè)輔基蛋白質(zhì)和一個(gè)發(fā)色團(tuán)組成的烯二炔類(lèi)抗腫瘤抗生素，在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞顯示出極強(qiáng)的細(xì)胞毒作用。其發(fā)色團(tuán)對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用，而其輔基蛋白有保護(hù)和穩(wěn)定發(fā)色團(tuán)的作用。輔基蛋白對(duì)各類(lèi)腫瘤細(xì)胞是否有結(jié)合作用，目前尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。因此本實(shí)驗(yàn)研究力達(dá)霉素輔基蛋白(LDP)在體外對(duì)腫瘤組織細(xì)胞是否有結(jié)合作用。 本實(shí)驗(yàn)第一部分是用異硫氰酸熒光素酯(FITC)對(duì)LDP進(jìn)行標(biāo)記。將LDP與FITC在堿性條件下反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)葡聚糖凝膠G15過(guò)濾

2、和半透膜透析純化后，并經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸電離一飛行時(shí)間(MAI.DI-TOF)質(zhì)譜檢測(cè)產(chǎn)物，結(jié)果顯示FTIC與LDP實(shí)現(xiàn)偶聯(lián)(以下稱(chēng)FITC-LDP偶聯(lián)物)，偶聯(lián)分子比為1:1。 本實(shí)驗(yàn)第二部分是研究FITc-LDP偶聯(lián)物與腫瘤組織細(xì)胞是否有特異性的結(jié)合作用。將FITc-LDP偶聯(lián)物與臨床常見(jiàn)的腫瘤組織如肺癌、胃癌、胰腺癌、直腸癌和乳腺癌新鮮冰凍組織標(biāo)本孵育(37℃，30min)，通過(guò)熒光顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)FITC-LDP偶聯(lián)物與

3、乳腺癌組織細(xì)胞有特異性結(jié)合。將FITC-LDP偶聯(lián)物與20例確診的乳腺癌石蠟標(biāo)本進(jìn)行孵育，按熒光強(qiáng)弱程度將染色結(jié)果分成陽(yáng)性、可疑、陰性3級(jí)，結(jié)果顯示FITC-LDP偶聯(lián)物陽(yáng)性染色11例，可疑4例，陰性5例。將乳腺癌生物學(xué)指標(biāo)如Her2、ER、P53、Bc1-2、：PCNA、MRP、PR、nm23的免疫組化染色結(jié)果同樣分成陽(yáng)性、可疑、陰性3級(jí)，來(lái)考察FITC-LDP偶聯(lián)物熒光染色結(jié)果與上述免疫組化的染色結(jié)果是否存在相關(guān)性，結(jié)果顯示，F(xiàn)IT

4、C-LDP偶聯(lián)物染色結(jié)果與ER、P53和Bc1-2染色結(jié)果分別經(jīng)Kappa一致性檢驗(yàn)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。FITC-LDP偶聯(lián)物熒光染色結(jié)果與ER、P53和Bc1-2免疫組化染色結(jié)果，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)性檢驗(yàn)，分別呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)、正相關(guān)(PO.05)。FITC-LDP偶聯(lián)物熒光染色結(jié)果與其它生物學(xué)指標(biāo)如Her2、PCNA、MRP、PR、nm23的免疫組化染色結(jié)果均無(wú)一致性和等級(jí)相關(guān)