乳酸桿菌pPG質(zhì)粒表達系統(tǒng)理想表達條件的探索.pdf

1、相對于大腸桿菌原核表達系統(tǒng)，乳酸菌表達系統(tǒng)還不夠成熟，主要表現(xiàn)在外源蛋白的表達量較低、乳酸菌的某些遺傳背景不夠清楚，操作比較繁瑣，表達條件相對不夠穩(wěn)定等，因此探索乳酸菌載體系統(tǒng)適宜的表達條件，提高表達量，建立乳酸菌表達系統(tǒng)的技術(shù)平臺，對表達的外源蛋白更有效的發(fā)揮作用具有重要的實踐意義。 本試驗對乳酸桿菌pPG質(zhì)粒表達系統(tǒng)理想表達條件進行了探索，以干酪乳桿菌 Lactobacillus casei 393為宿主菌，β-葡萄糖苷酸酶

2、(gusA)基因作為表達的報告基因，探索了其表達過程中誘導(dǎo)物種類、誘導(dǎo)物濃度、誘導(dǎo)時間、培養(yǎng)基pH、培養(yǎng)方式等各個影響表達的關(guān)鍵因素進行了研究。試驗結(jié)果表明，活化的種子菌以1％接種于MRS液體培養(yǎng)基，并用1％乳糖為誘導(dǎo)物，初始培養(yǎng)基pH值在6.0～7．0之間，30℃或32℃，靜止培養(yǎng)約7～8小時，菌液濃度至A<,590>OD達0.5，表達效率最高，外源蛋白的表達量可占菌體總蛋白的14％。分泌表達載體干酪乳桿菌pPG-2-/L.393上清

3、液分別經(jīng)4℃透析和冷凍干燥濃縮50倍后，West blot未檢測到目的蛋白，而將pPG-2/L.393的菌體沉淀經(jīng)West blot檢測后出現(xiàn)明顯的目的帶，由此說明干酪乳桿菌pPG-2/L.393表達的gusA目的蛋白仍結(jié)合在菌體上：培養(yǎng)基中葡萄糖的濃度對gusA的表達有抑制作用。當(dāng)葡萄糖終濃度為0.1％以下時對pPG-1/L.393表達gusA未見明顯影響，而當(dāng)其含量達到0.5％時，表達量明顯下降，至葡萄糖濃度達到2％時，基本看不到g