中山市健康成人EB病毒感染特點的研究.pdf

1、鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我國南方常見的惡性腫瘤之一，它具有很強(qiáng)的地域傾向性。中山市位于我國南方珠江三角洲，是鼻咽癌高發(fā)區(qū)。關(guān)于鼻咽癌的病因?qū)W一直以來都是研究的熱點，目前認(rèn)為，EB病毒感染、環(huán)境致癌因素和遺傳易感性是鼻咽癌的三大致病因素。 EB病毒屬于人類γ皰疹病毒，是一種人類普遍感染的嗜B淋巴細(xì)胞病毒，其感染與多種疾病，尤其是與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。在國際癌癥研究中心(IARC)的最近報告

2、中已將EB病毒列為第一組致癌物。EB病毒感染與鼻咽癌密切相關(guān)，并且在其發(fā)生發(fā)展中起重要作用。流行病學(xué)調(diào)查表明，世界上90﹪以上的人群都有EB病毒的感染。EB病毒感染后，可長期存在于人體內(nèi)，呈潛伏感染狀態(tài)。雖然EB病毒感染具有普遍性，但是，只有少數(shù)感染者會發(fā)生鼻咽癌。基于EB病毒感染的普遍性以及鼻咽癌發(fā)病的地域斷口人種傾向性，因此，是否存在與鼻咽癌高發(fā)相關(guān)的．EB病毒株以及個體對EB病毒的免疫狀態(tài)是個很令人感興趣的課題。 1.研究

3、目的 本研究將以鼻咽癌高發(fā)區(qū)(中山地區(qū))的原住居民中EB病毒健康攜帶者(366人)和外省來的中山臨時居民(81人)作為研究對象，檢測中山原住居民的外周血單個核細(xì)胞中EB病毒LMP1基因羧基端30bp缺失的變異情況，及其外周血血清中的多種EB病毒抗體水平，比較來自不同地域的人群的抗EB病毒的抗體譜特點；以了解鼻咽癌高發(fā)區(qū)的健康攜帶者感染EB病毒的特征，探討EB病毒感染與鼻咽癌發(fā)病的地域陛之間可能的聯(lián)系，為鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究

4、提供一些理論依據(jù)。 2．研究方法1)根據(jù)GeneBank中公布的FR病毒野生型LMPl基因的C端，設(shè)計巢式PCR引物，用于擴(kuò)增樣本DNA中EB病毒的LMPl基因C端。瓊脂糖電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物，并測序分析擴(kuò)增得到的基因片斷。 2)運用免疫酶標(biāo)法檢測樣本血清中VCA-IgA和EA-IgA抗體滴度；酶聯(lián)免疫吸附(ELISA),法檢測樣本血清中EBNA1-IgA，EBNA1-IgG,Zta-IgA,Zta-IgG；VCA-p18I-gA和

5、VCA-p18-IgG六項抗體水平，從不同層面分析比較樣本血清中的抗體特征。 3．研究結(jié)果 1)在366例中山籍貫樣本中，除去兩例因標(biāo)本不合格沒有檢測之外，其余364例樣本中，共有133例(36.54﹪)檢測到LMPl基因；其中占主導(dǎo)地位(93.98﹪)的為野生型LMP1基因，有6例為缺失型LMP1基因，占陽性擴(kuò)增例數(shù)的4.52﹪；而野生型LMP1基因和缺失型LMP1基因共存的只有2例，占陽性擴(kuò)增例數(shù)的1.50﹪。

6、 2)LMP1基因檢測的陽性率高峰期為20～29歲年齡段，其次為40～49歲年齡段。 3)樣本外周血單個核細(xì)胞是否能檢測到LMP1基因并不影響其血清中EB病毒抗體水平。 4)各項抗體的水平一般在50～59歲年齡段或者在隨后的年齡段達(dá)到高峰期?？傮w上，在50歲以后年齡段比50歲以前的抗體水平要高。 5)與外省籍貫中山臨時居民相比，中山籍原住居民的Zta-IgA和VCA-p18-IgA兩項抗體水平(相對光密度值，rOD值)

7、都呈現(xiàn)偏高的趨勢，而且除個別年齡段以外，均顯著高于外省籍貫的中山臨時居民。 6)比較兩類籍貫群體的樣本的抗體譜，發(fā)現(xiàn)IgA類的三項抗體組合比IgG類抗體組合更具有意義，外省籍貫的中山臨時居民EBNAl-IgA、Zta-IgA和VCA-p18-IgA三項皆陰或EBNAl-IgA單項陽性的比率高于中山籍貫居民，相反，中山籍貫居民的Zta-IgA單項陽性率，或Zta-IgA和VCA-p18-IgA同時陽性率都明顯高于外省籍貫市民。這提

8、示：中山原住居民比外省籍貫的臨時居民具有較高的抗EB病毒溶解性感染抗原的抗體水平，即呈潛伏感染的EB病毒靜止期B-淋巴細(xì)胞容易被一再激活(reactivation)，因而罹患鼻咽癌的風(fēng)險性也較高。 7)六項ELISA檢測的抗體水平基本上呈平行狀態(tài)。每種抗原對應(yīng)的IgA和IgG抗體水平也是平行的，但檢出率方面兩類抗體存在較大差異。 8)通過比較，進(jìn)一步驗證了ELISA檢測抗體的方法優(yōu)于免疫酶標(biāo)(immunoenzymati

9、c method，IE法)，ELISA更為敏感。 4．結(jié)論 1)與鼻咽癌患者相比，中山市健康人群感染的EB病毒以LMPl野生型株為主，LMP1檢出率高峰年齡組為20～29歲，其次為40～49歲。 2)中山籍貫原住居民的EB病毒抗體譜特征顯示其個體內(nèi)EB病毒更多的處于激活狀態(tài)，與外省籍貫臨時居民比較而言其罹患鼻咽癌的風(fēng)險更高。 3)我周血單個核細(xì)胞中LMP1基因的檢出率與其外周血EB病毒抗體水平無明顯關(guān)系。