p300介導乙?；揎椗c心臟發(fā)育相關基因的表達.pdf

1、目的：本研究通過檢測小鼠胚胎心臟發(fā)育過程中GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因轉錄水平的動態(tài)表達和這些基因啟動子區(qū)組蛋白H3乙?；降淖兓约敖M蛋白乙?；竵喰蚿300是否參與調控上述四種心臟發(fā)育相關基因的表達，從表觀遺傳組蛋白乙?；揎椀慕嵌龋醪教接懪咛バ呐K發(fā)育過程中多基因時序表達的染色質重塑調控模式，為進一步研究先天性心臟疾病的發(fā)生機制奠定理論基礎。
　　 材料與方法：選取胎齡10.5天和16.5天昆明小

2、鼠正常胚胎心臟，用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應（quantitativepolymerase chain reaction，Q-PCR）方法觀察GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA的動態(tài)表達；采用染色質免疫沉淀（Chromatinimmunoprecitation，ChIP）技術，分別用ChIP級抗乙酰化的組蛋白H3抗體和抗p300抗體免疫沉淀與其所結合的DNA，設計針對心臟發(fā)育相關基因啟動子區(qū)

3、的DNA引物，用Q-PCR的方法擴增抗體所富集的上述基因啟動子。DNA，觀察胚胎心臟發(fā)育過程中組蛋白乙酰化水平及組蛋白乙?；竵喰蚿300是否參與調控上述四種心臟特異轉錄因子的表達。
　　 結果：
　　 1.心臟發(fā)育相關基因GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA表達水平在心臟發(fā)育的不同階段（胎齡10.5天和16.5天）呈現(xiàn)動態(tài)變化，其中GATA4、MEF2C基因mRNA相對β-actin的表達水平，E

4、10.5明顯低于E16.5（P<0.01），而Nkx2.5、Tbx5 mRNA相對表達水平，E10.5明顯高于E16.5（P<0.05）。
　　 2.染色質免疫沉淀（CHIP）分析顯示，胎齡10.5天和16.5天小鼠胚胎心臟組織中，這些基因啟動子區(qū)存在著組蛋白H3的乙?；降牟町悾町悷o統(tǒng)計學意義（P>0.05）。其中Nkx2.5、MEF2C和Tbx5基因啟動子區(qū)組蛋白乙?；阶兓厔菖c相應基因的mRNA表達水平變化趨勢相

5、一致。同時，染色質免疫共沉淀檢測結果顯示p300與GATA4，Nkx2.5，MEF2C和Tbx5基因啟動子通過某種方式相互結合?？筽300抗體免疫沉淀的上述基因啟動子DNA量在這兩個小鼠心臟發(fā)育的關鍵階段有所不同，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　 結論：
　　 數(shù)據(jù)表明，心臟特異轉錄因子的動態(tài)表達可能是通過調節(jié)相應基因啟動子區(qū)組蛋白H3的乙?；瘉砑せ罨騿幼訉崿F(xiàn)的，p300可能參與了這一過程。這些結果提示p3