前列腺癌組織中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化序列分析.pdf

1、[背景] 前列腺癌(PCA)是美國(guó)男性中第二位的癌癥死亡原因,并且九分之一的65歲以上的老年男性會(huì)受到該疾病的困擾。據(jù)報(bào)道,2001美國(guó)有200,000的被診斷為前列腺癌,31,500患者死于前列腺癌。近年來(lái),我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率也呈逐漸上升趨勢(shì)。對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)的局灶性前列腺癌的患者進(jìn)行前列腺癌根治手術(shù)是最好的治療手段,愈后理想。因此,前列腺癌檢測(cè)的目標(biāo)就在于能夠在疾病的早期和可以達(dá)到根治的階段明確診斷。當(dāng)前,前列腺癌主要依靠直腸指診和血

2、清前列腺特異性抗原(PSA)水平進(jìn)行篩選,在前列腺癌的患者中,PSA往往呈現(xiàn)較高的水平,最后依靠經(jīng)直腸穿刺活檢明確診斷。但是,PSA的低特異性常常出現(xiàn)大量的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果,影響臨床判斷。所以,探索一個(gè)新的前列腺癌特異性的診斷指標(biāo)是亟待解決的課題。 抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)域CPG島的超甲基化導(dǎo)致基因表達(dá)缺失,這是人類腫瘤的-個(gè)普遍特點(diǎn)。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSTs)是一組能夠通過(guò)催化細(xì)胞內(nèi)外源性化學(xué)物質(zhì)和致癌物與谷胱甘肽進(jìn)行結(jié)合,從而達(dá)

3、到細(xì)胞內(nèi)解毒保護(hù)組織細(xì)胞作用的家族酶系。其中,GSTP1是其中分布最為廣泛,且在癌癥中研究最為深入的一種。國(guó)外報(bào)道,在前列腺癌組織中GSTP1基因5'端啟動(dòng)子編碼區(qū)出現(xiàn)了超甲基化的表現(xiàn),甲基化發(fā)生頻率高達(dá)90～96％。然而,國(guó)內(nèi)的一項(xiàng)研究報(bào)道,在50例前列腺癌組織中GSTP1基因非甲基化發(fā)生率為86％,并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)甲基化。這與國(guó)外的研究截然不同,因此,對(duì)我國(guó)人群中前列腺癌患者進(jìn)行GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)分析是值得我們深入研究的。

4、 [目的]探討中國(guó)人群前列腺癌、前列腺增生以及正常前列腺組織中GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)域CPG島的甲基化狀態(tài),探索前列腺癌早期診斷的檢測(cè)方法。 [方法]收集31例前列腺癌組織(PCa)、18例前列腺增生組織(BPH)以及3例正常前列腺組織(NP)。提取組織DNA后進(jìn)行重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化,通過(guò)巢式甲基化特異性聚合酶連反應(yīng)(NMSP)方法檢測(cè)GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行甲基化狀態(tài),并應(yīng)用T-載體連接,大腸桿菌感態(tài)細(xì)胞對(duì)目的基因克

5、隆測(cè)序。 [結(jié)果]PCA、BPH和NP組GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化的發(fā)生率分別為83％,0％和0％。19條PCA基因序列的(19×38)722個(gè)CG位點(diǎn),28條BPH基因序列的(28×38)1064個(gè)CG位點(diǎn)以及29條NP基因序列的(29×38)1102個(gè)CG位點(diǎn)的甲基化率分別為96％,34％和37％?？ǚ綑z驗(yàn)分析,PCA組和BPH、NP組GSTP1基因啟動(dòng)子區(qū)域CG位點(diǎn)的甲基化率具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,BPH組和NP組GST