重組谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1抑制炎性反應的研究.pdf

1、GSTP1(GSTπ)是人體內(nèi)谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶(GST)的一種重要的活性亞型，屬于機體內(nèi)源性蛋白，不會引起免疫原反應，在維持細胞的正常機能中發(fā)揮著重要作用，也是一種具有臨床應用價值的抗氧化劑。本實驗室已有研究發(fā)現(xiàn)GSTP1參與調(diào)控了由LPS引起的炎癥反應。在小鼠巨噬樣細胞株RAW264.7中，LPS刺激能上調(diào)內(nèi)源性GSTP1的mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平。在細胞內(nèi)通過瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的手段過表達GSTP1，過表達的GSTP1以劑

2、量和時間依賴性地抑制了LPS激活的MAPKs，包括ERK、JNK和p38，以及NF-κB信號通路。此外還發(fā)現(xiàn)，通過抑制上游的信號通路，GSTP1抑制了TNF-α和一氧化氮(NO)的合成和釋放。本實驗中，我們證實了在RAW264.7細胞中，外源性的GSTP1蛋白可以抑制LPS刺激iNOS與COX-2的大量表達。動物模型上的結(jié)果表明，通過腹腔注射GSTP1蛋白可以有效地抑制全身炎性反應，具體包括減少了內(nèi)毒素休克的致死率，緩解了LPS誘發(fā)的急

3、性肺損傷及巰基乙酸鹽導致的急性腹膜炎。與此同時，我們還發(fā)現(xiàn)外源性的GSTP1可以抑制LPS誘導的TNF-α，IL-1β，MCP-1和NO的產(chǎn)生。進一步，我們通過激光共聚焦顯微術(shù)與流式細胞術(shù)觀察到，培養(yǎng)液中添加的GSTP1蛋白可以進入小鼠巨噬樣細胞株RAW264.7細胞、小鼠腹腔巨噬細胞和人胚腎細胞株293細胞，這提示我們胞外的GSTP1蛋白可以轉(zhuǎn)運至胞內(nèi)并在胞漿中發(fā)揮作用。綜上，我們從體外和在體兩方面研究了重組的GSTP1蛋白對于炎癥損