人谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶通過調(diào)節(jié)MEKK1活性抑制MEKK1介導(dǎo)的HEK293細胞凋亡的相關(guān)研究.pdf

1、谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶(G1utathion s-transferase，GST)是細胞內(nèi)降解生物異源物質(zhì)的一組超家族同工酶。GSTs作為一類II期解毒酶，通過催化還原型谷胱甘肽結(jié)合到內(nèi)源或者外源的親電基團上，從而對胞內(nèi)大分子起保護作用。此外，GSTs能以配基形式和胞內(nèi)激酶相互作用，從而調(diào)控激酶介導(dǎo)的信號通路。GSTs可以通過與關(guān)鍵的胞內(nèi)激酶形成配體相互作用從而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，影響細胞的增殖和凋亡。人谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1(GSTPl)是細胞

2、內(nèi)降解生物異源物質(zhì)的一組超家族同工酶中的一個重要的亞型。 MEKKl作為一個196KD的激酶，參與了JNK信號通路以及細胞凋亡過程的調(diào)節(jié)。瞬時過表達MEKKl時，自身會切割成為一個91KD的活性片段，引發(fā)凋亡。當(dāng)細胞暴露在基因損傷類試劑如etoposide刺激時，MEKKl的Asp874會被CaSDase切割。切割后釋放出的MEKKl激酶域自身又能進一步活化Caspase，最終導(dǎo)致細胞凋亡。 課題研究揭示了GSTPl在

3、調(diào)節(jié)MEKKl-MKK7信號通路中的新功能。在HEK293細胞中過表達GSTPl能抑制△MEKKl引發(fā)的細胞凋亡，過表達GsTPl同樣可以抑制Etoposide誘導(dǎo)的細胞凋亡。光學(xué)顯微鏡觀測和AO／EB雙染色結(jié)果均證實了這種抑制作用的存在。westem方法檢測下游凋亡信號caspase-3前體的激活以及PARP的切割情況，和凋亡現(xiàn)象相對應(yīng)。胞內(nèi)表達的△MEKKl活性可被過表達的GSTPl抑制，且呈劑量依賴型。體外誘導(dǎo)表達純化GsTPl蛋

4、白，用原核表達的無活性MKK7蛋白作底物，進行體外激酶活性分析，結(jié)果顯示MEKKl的活性同樣劑量依賴的被GsTPl抑制。此外，研究發(fā)現(xiàn)，GsTPl的谷胱甘肽結(jié)合活性與這種抑制作用密切相關(guān)。Etoposide誘導(dǎo)的細胞凋亡已被證實與MEKKl的激活有關(guān)，由此可見，GSTPl抑制的etoposide引發(fā)的細胞凋亡很大程度是由于抑制了MEKKl的活性。研究結(jié)果闡明了GsTPl保護基因損傷類藥物引發(fā)的細胞凋亡的機制是通過抑制基因損傷類藥物引發(fā)的