蕓香苷對(duì)家蠶谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因的誘導(dǎo)表達(dá)研究.pdf

1、I蕓香苷對(duì)家蠶谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶基因的誘導(dǎo)表達(dá)研究中文摘要家蠶(Bombyxmi)是鱗翅目昆蟲(chóng)的模式生物，蕓香苷是一種植物次生物質(zhì)，昆蟲(chóng)利用解毒酶系進(jìn)行代謝是其適應(yīng)植物次生物質(zhì)的重要方式。本研究以家蠶為研究對(duì)象，對(duì)目前家蠶實(shí)時(shí)定量PCR研究中常用的內(nèi)源參照基因進(jìn)行分析，與雙跟蹤標(biāo)定定量PCR方法進(jìn)行比較。應(yīng)用此方法，對(duì)蕓香苷誘導(dǎo)后家蠶谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了定量研究。本文的主要研究?jī)?nèi)容如下：1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR中兩種歸一化方

2、式的比較本實(shí)驗(yàn)采用雙跟蹤標(biāo)定定量PCR方法，測(cè)定了BmGSTd1基因在正常飼養(yǎng)及添食蕓香苷(5102ngL)后在中腸和脂肪體中的轉(zhuǎn)錄水平。同時(shí)用目前常用的兩種管家基因(Actin3GAPDH)作為內(nèi)參對(duì)qPCR數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)內(nèi)參和外源參照基因標(biāo)準(zhǔn)化的結(jié)果差異很大；隨后檢測(cè)兩種管家基因在正常情況下及蕓香苷誘導(dǎo)后的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示，二者在不同組織中的轉(zhuǎn)錄水平均不恒定，且在誘導(dǎo)后會(huì)發(fā)生變化。分析比較這些結(jié)果表明，管家基因在誘導(dǎo)后的

3、表達(dá)不再恒定，而外源基因則不受實(shí)驗(yàn)條件的影響，能保證定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。選擇加入外源參照基因?qū)PCR數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理，是家蠶誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)基因表達(dá)的合適方法。2、不同濃度蕓香苷溶液對(duì)BmGSTs基因的誘導(dǎo)作用采用雙跟蹤標(biāo)定定量PCR方法，檢測(cè)了添食不同濃度蕓香苷溶液家蠶5齡幼蟲(chóng)的中腸和脂肪體中GSTsOmega家族不同基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示，添食濃度為5102ngL的蕓香苷溶液能誘導(dǎo)GSTs基因的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生顯著變化：與對(duì)照相比，中

4、腸中BmGSTo1、BmGSTo2和BmGSTo3基因在誘導(dǎo)后24h的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平分別上升了7141、1391和3398倍；在脂肪體中BmGSTo1的轉(zhuǎn)錄水平最高且在誘導(dǎo)后2h達(dá)到最大值。與添食5102ngL蕓香苷溶液處理組相比，5101ngL蕓香苷溶液誘導(dǎo)后脂肪體中各基因的轉(zhuǎn)錄水平上升的幅度較小并且達(dá)到峰值的時(shí)間不同，而添食5103ngL蕓香苷溶液不能使BmGSTs基因的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生變化。IIIRutininducedexpressi

5、onofglutathioneStransferasegenesinBombyxmiAbstractBombyxmiisoneofmodelganismsinLepidopterarutinisoneofplantsecondarymetabolitesusingdetoxificationenzymestoetabolizeitisanimptantwayfinsectsadapttoplantsecondarymetabolites

6、.ThisresearchtaketheBombyxmiastheobjectofstudythroughthecurrentrealtimequantitativePCRstudyofsilkwmcommonlyusedendogenousreferencegeneanalysiscomparewiththedualspikeinqPCRmethod.Usingthisnewmethodhasconductedtheinduction

7、ofexpressionofglutathioneStransferasegenesinBombyxmibyrutin.Themainresultsareasfollowed.1.ComparingthebothmethodofnmalizationinrealtimequantitativePCRInthisstudywedetectedtranionlevelsofBmGSTd1ingutfatbodyfromfifthinstar

8、Bombyxmilarvaetreatedwithofrutin(5102ngL).IndertosuitablereferencegeneftheinductionexperimentsinB.mithetranionlevelsofBmGSTd1indifferenttissuesofB.mitreatedwithrutinweredetectedwithtwohousekeepinggenes(Actin3GAPDH)joinin

9、ganexogenousgene(IFP2)freferencetonmalizethedata.ThenthetranionlevelsoftwohousekeepinggenesingutfatbodyoffifthinstarB.milarvaetheirresponsestorutinwereinvestigated.Theresultsshowedthatbothtranionlevelsindifferentganizati

10、onsarenotconstantchangealotafterinduction.Theresultsshowedthatexpressionsofhousekeepinggeneswerenotconstantafterinductionwhileexogenousgenerisesuperitoexperimentalconditionscanguaranteetheaccuracyoftheresults.InB.mijoini