Alpha-黑素細(xì)胞刺激素調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化的分子機制.pdf

1、本文對Alpha-黑素細(xì)胞刺激素調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化的分子機制進(jìn)行了研究。文章分為三個部分： 第一部分，利用白血病T淋巴瘤Jurkat細(xì)胞株作為研究對象，采用ELISA方法對不同刺激因素活化的T淋巴細(xì)胞和/或α-MSH(10<'-7>mol/L)處理的細(xì)胞培養(yǎng)物離心后的上清進(jìn)行細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、TNF-α、IFN-γ測定：FACS分析T淋巴細(xì)胞表面分子CD3、U1A-1、CD45、活化標(biāo)志CD69等表達(dá)

2、的變化。 第二部分，采用蔗糖密度梯度低溫超速離心技術(shù)對T淋巴細(xì)胞脂筏進(jìn)行分離并對不同密度的脂筏進(jìn)行收集；利用三氯醋酸(TCA)蛋白沉淀方法對不同密度的脂筏內(nèi)蛋白進(jìn)行沉淀和純化；利用Brad-Ford蛋白定量方法對不同脂筏組分蛋白進(jìn)行定量分析；SDS-PAGE技術(shù)對脂筏內(nèi)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析；利用FACS技術(shù)結(jié)合β-環(huán)糊精可去除脂筏內(nèi)膽固醇成分的原理對脂筏內(nèi)信號蛋白分子進(jìn)行定量分析；利用脂筏特異性標(biāo)志物GM1的熒光標(biāo)記配體——

3、霍亂腸毒素亞單位B(CT-B)作為示蹤劑，在激光共聚焦顯微鏡下對脂筏的分布及聚集情況進(jìn)行觀察；采用熒光實時(Real-time)定量PCR技術(shù)對脂筏主要成分GM3分子合成酶的基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行定量分析。 第三部分，采用白血病B淋巴瘤Raji細(xì)胞株作為抗原提呈細(xì)胞(APC)，以超抗原葡萄球菌腸毒素B(SEB)進(jìn)行抗原負(fù)載，然后與T淋巴細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合以形成IS并作為研究對象：在α-MSH處理因素下，利用熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜表面特定抗原的抗