α-黑素細(xì)胞刺激素類(lèi)似物對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化的治療作用.pdf

1、肺纖維化是多種急慢性肺間質(zhì)疾病的共同轉(zhuǎn)歸。α-黑素細(xì)胞刺激素(α-MSH)具有較強(qiáng)的抗炎作用,可減輕缺血再灌注損傷。內(nèi)毒素(LPS)誘導(dǎo)的全身炎癥反應(yīng)以及博萊霉素(BLM)誘導(dǎo)的急性肺損傷,但目前尚無(wú)α-MSH預(yù)防BLM誘導(dǎo)的肺纖維化的研究。α-MSH類(lèi)似物是在α-MSH基礎(chǔ)上進(jìn)行蛋白修飾后合成的作用更強(qiáng)、更持久的抗炎藥物,本研究擬用α-MSH類(lèi)似物來(lái)治療BLM誘導(dǎo)的肺損傷,以評(píng)估其抗炎、抗纖維化的作用,并探討可能機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)一

2、、α-MSH類(lèi)似物對(duì)BLM誘導(dǎo)的致死性肺纖維化小鼠生存狀況的影響 目的：觀察α-MSH類(lèi)似物對(duì)BLM誘導(dǎo)的致死性肺纖維化小鼠生存狀況的影響。 方法:C57BL/6小鼠取40只,隨機(jī)分為假手術(shù)組[NS 40μl氣管內(nèi)滴入+磷酸鹽緩沖液(PBS)40μl腹腔注射,1/日,給藥途徑下同]、模型組(BLM 5mg/kg+PBS液40μl)、低劑量α-MSH類(lèi)似物治療組(BLM 5mg/kg+α-MSH類(lèi)似物1.25mg/kg)和

3、高劑量α-MSH類(lèi)似物治療組(BLM 5mg/kg+α-MSH類(lèi)似物2.5mg/kg),每組10只。觀察14日各組小鼠生存狀況。 結(jié)果：α-MSH類(lèi)似物治療可有效減輕BLM誘導(dǎo)的癥狀和體征如發(fā)紺、呼吸急促、活動(dòng)量減少等,顯著提高小鼠14日觀察期的生存率,延長(zhǎng)小鼠的平均生存時(shí)間,且存在一定的量效關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)二、α-MSH類(lèi)似物對(duì)BLM誘導(dǎo)的非致死肺纖維化小鼠的治療作用 目的：本研究觀察α-MSH類(lèi)似物對(duì)BLM誘導(dǎo)的

4、非致死肺纖維化小鼠的治療效果,以評(píng)估其抗炎、抗纖維化的作用,并探討可能機(jī)制。 方法:C57BL/6小鼠取108只,隨機(jī)分為假手術(shù)組(NS 40μl氣管內(nèi)滴入+PBS液40μl腹腔注射,1/日,給藥途徑下同)、肺纖維化模型組(BLM 3mg/kg+PBS液40μl)、低劑量α-MSH類(lèi)似物治療組(BLM 3mg/kg+α-MSH類(lèi)似物0.625mg/kg)、中劑量α-MSH類(lèi)似物治療組(BLM 3mg/kg+α-MSH類(lèi)似物1.2

5、5mg/kg)、高劑量α-MSH類(lèi)似物治療組(BLM3mg/kg+α-MSH類(lèi)似物2.5mg/kg)、地塞米松治療組(BLM 3mg/kg+地塞米松1mg/kg)。術(shù)后7、9和14日每組分別取6只處死,收集肺組織標(biāo)本待行下列檢查：①7日,行支氣管肺泡灌洗,將灌洗液離心后,沉淀行Wright-Giemsa染色,干燥后油鏡下行細(xì)胞計(jì)數(shù)并分類(lèi),上清液行TNF-α、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)和巨噬細(xì)胞炎

6、性蛋白-1(MIP-1)檢查；②9日,real time-PCR法檢測(cè)右下肺中膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ、基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)和金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表達(dá),檢測(cè)右中上肺NO含量,免疫組化法檢測(cè)左肺TGF-β1、平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)；③14日,左肺行HE和Masson三色膠原染色,酸解法測(cè)定右肺羥脯氨酸含量。 結(jié)果： ①α-MSH類(lèi)似物可降低BLM誘導(dǎo)的肺內(nèi)TNF-α、MC

7、P-1和MIP-1水平的增加,并抑制炎性細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞趨化至肺,且呈劑量依賴(lài)性； ②α-MSH類(lèi)似物可通過(guò)減輕肺內(nèi)炎癥反應(yīng),減少BLM引起的肺內(nèi)NO合成增加,進(jìn)而減輕肺內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化作用,保護(hù)肺實(shí)質(zhì)細(xì)胞功能； ③α-MSH類(lèi)似物可減少TGF-β1的分泌,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的清除(提高M(jìn)MP-1/TIMP-1比值),從而降低肺內(nèi)Ⅰ、Ⅲ型膠質(zhì)蛋白合成,減少肺組織羥脯氨酸的含量。肺組織HE染色、Masso