大豆皂甙的結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性研究.pdf

1、大豆皂甙廣泛存在于豆科植物中，大豆是皂甙的主要膳食來源。對(duì)于大豆皂甙的結(jié)構(gòu)與分類以及生物活性研究已有不少文獻(xiàn)報(bào)道，有關(guān)大豆皂甙降血脂、抗癌、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、抗誘變和抑制HIV病毒等方面的研究工作更是成為學(xué)術(shù)界研究的熱點(diǎn)。但是關(guān)于大豆皂甙抗腫瘤、降血脂的作用機(jī)制研究卻鮮見報(bào)道。本文以天門大豆為原料，利用HPLC-ESI／MS<'2>對(duì)分離純化得到的大豆皂甙進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并采用生物學(xué)前沿技術(shù)激光掃描共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、RT-PCR等

2、對(duì)大豆皂甙的生物活性，包括抗氧化、體內(nèi)外抗腫瘤、降血脂的功能作用與機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)的探索。 主要研究結(jié)果如下： 1.大豆皂甙的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定 脫脂大豆粉用80％乙醇溶液按1:27(W／V)的料液比在60℃下浸提5h，連續(xù)提取三次后達(dá)到最佳效果，大豆皂甙的提取率為2.58％。大豆皂甙醇提液經(jīng)濃縮、正丁醇萃取、乙酸乙酯沉淀和大孔樹脂D101A柱層析等方法純化得到了SS-Ⅰ、SS-Ⅱ和SS-Ⅲ三個(gè)組分，得率分別為0.

3、107％、0.093％和0.047％。采用HPLC-ESI／MS<'2>聯(lián)用技術(shù)對(duì)這三個(gè)組分進(jìn)行系統(tǒng)分析與鑒定，發(fā)現(xiàn)SS-Ⅲ中含有Ba、Bb、Bc、Bb’和Be五種皂甙，SS-Ⅱ中除了含有SS-Ⅲ中五種皂甙外還含有A2，與SS-Ⅲ比較，SS-Ⅰ中還富含Al、A4和A2三種皂甙。 2.大豆皂甙體外抗脂質(zhì)過氧化研究 大豆皂甙在體外具有很強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化活性。在大鼠肝勻漿和肝線粒體中加入不同濃度的SS-Ⅰ和SS-Ⅱ，分別研究了

4、它們對(duì)大鼠肝組織自發(fā)性、H<,2>O<,2>-Fe<'2+>誘導(dǎo)肝組織損傷和肝線粒體生成MDA的影響。結(jié)果表明SS-Ⅰ和SS-Ⅱ均能抑制大鼠肝組織和肝線粒體脂質(zhì)過氧化物的生成，對(duì)H<,2>O<,2>-Fe<'2+>誘導(dǎo)的肝組織過氧化損傷具有保護(hù)功效。在同樣的濃度范圍內(nèi)，SS-Ⅰ抑制脂質(zhì)過氧化作用的能力強(qiáng)于SS-Ⅱ，這可能與其組成及分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。 3.大豆皂甙對(duì)人宮頸癌HeIa細(xì)胞凋亡的研究 首次提出大豆皂甙誘導(dǎo)人宮頸癌H

5、ela細(xì)胞凋亡是其抗腫瘤活性的主要機(jī)制，細(xì)胞周期改變、線粒體跨膜電位下降、細(xì)胞胞漿內(nèi)Ca<'2+>濃度升高以及NO含量增加可能是細(xì)胞凋亡的作用機(jī)理之一。MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)100-400m/L的SS-Ⅱ?qū)ela細(xì)胞的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，且具有時(shí)間-效應(yīng)和劑量-效應(yīng)關(guān)系，并且對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞L929生長(zhǎng)的影響較小。采用倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、透射電鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡觀察到SS-II作用4d后的Hela細(xì)胞呈典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。TUN

6、EL實(shí)驗(yàn)也證實(shí)SS-II能誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡。與對(duì)照組比較，流式細(xì)胞儀檢測(cè)到SS-II作用的Hela細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生改變，并且細(xì)胞線粒體跨膜電位降低，激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)凋亡細(xì)胞胞內(nèi)Ca<'2+>濃度極顯著升高，同時(shí)細(xì)胞中NO含量、NOS和iNOS活性顯著增加。 4.大豆皂甙對(duì)H<,22>荷瘤小鼠抗腫瘤作用的研究 以H<,22>荷瘤小鼠為模型，灌胃10mg/kg.d、20mg/kg.d和30mg/kg.d的SS-I

7、I 20d后均可顯著抑制H<,22>移植瘤的生長(zhǎng)：30mg/kg.d的SS-II能顯著提高H<,22>荷瘤小鼠的遲發(fā)型超敏反應(yīng)強(qiáng)度，三個(gè)劑量組的SS-II均能顯著促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞活性。攝入適量的SS-II能降低H<,22>荷瘤小鼠肝臟中MDA含量，并增強(qiáng)SOD活性。與環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組相比，SS-II不妨礙小鼠正常生長(zhǎng)，對(duì)機(jī)體沒有毒副作用。研究表明，SS-II增強(qiáng)H<,22>荷瘤小鼠細(xì)胞免疫功能和提高機(jī)體抗氧化能力是其抗腫瘤

8、的重要作用機(jī)制之一。 5.大豆皂甙預(yù)防高脂血癥的作用及其分子機(jī)制研究 大豆皂甙通過調(diào)節(jié)肝臟LPL(脂蛋白酯酶)轉(zhuǎn)錄水平和提高抗氧化能力抑制脂質(zhì)過氧化物來預(yù)防高脂血癥，這一結(jié)論未見報(bào)道。與高脂模型組比較，高脂飲食同時(shí)攝入大豆皂甙(10mg/kg.d、20mg/kg.d、30mg/kg.d)6星期后，這三個(gè)劑量組小鼠血清中TC、TG和LDL-C的含量均分別降低達(dá)30％、50％和30％以上，HDL-C含量均升高28％以上。適量