恩度對(duì)不同狀態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞及相應(yīng)標(biāo)記物的影響.pdf

1、目的：檢測(cè)恩度(rh-endostatin)對(duì)不同長(zhǎng)狀念的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilicalveinentheiail cell,HDVEC)的抑制作用，以及對(duì)其表面分子標(biāo)志物的影響，研究二得的內(nèi)在聯(lián)系并深入研究恩度的作用機(jī)制。 方法： 1、制備三種生長(zhǎng)狀態(tài)的HUVEC細(xì)胞。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)剛貼壁細(xì)胞、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞及經(jīng)不剛濃度TNF-α激活的HUVEC細(xì)胞的分子表面標(biāo)志物CD146、CD105、CD

2、62E的變化情況。 2、檢測(cè)恩度作用子不同生長(zhǎng)狀態(tài)的內(nèi)皮細(xì)胞后的標(biāo)記物變化情況。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)恩度作用于剛壁細(xì)胞、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞子及經(jīng)不同濃度TNF-αl用的HUVEC細(xì)胞的分子表面標(biāo)志物CD105、CD146、CD62E的變化情況。 3、應(yīng)用SPSS11.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，探討各表面標(biāo)記物與細(xì)胞生長(zhǎng)的不同狀態(tài)、及其經(jīng)恩度作用后的變化與其不同作用濃度和時(shí)間的關(guān)系。 結(jié)果：恩度作用前 HUVEC表

3、面分子標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果：(1)剛貼壁HCVEC細(xì)胞：CD105隨貼壁時(shí)間延長(zhǎng)而增加，經(jīng)單因素方差分析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CD62E不隨貼時(shí)間變化(P>0.05)。(2)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HUVEC細(xì)胞：CD146、CD105呈持續(xù)穩(wěn)定地高表達(dá)，CD62E呈低表達(dá)。(3)經(jīng)不同濃度TNF-α作用的HUVEC細(xì)胞：CD146仍呈持續(xù)的高表達(dá)，與對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的比較，無顯著性差異(P>0.05)：CD105在6h內(nèi)隨濃度增加下調(diào)，單因素方差分

4、析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)過24h又回調(diào)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)的高水平；CD62E6h內(nèi)隨濃度增加漸升高，在250IU/ml處達(dá)峰值，單因素方差分析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)過24h又回調(diào)至對(duì)烽生長(zhǎng)期時(shí)的低水平。恩度作用后HUVEC表面分子標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果：(1)CD105的變化：剛貼壁HUVEC細(xì)胞、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞、經(jīng)TNF-α250IU/ml作用6h后細(xì)胞其表達(dá)均隨恩度的作用濃度及時(shí)間變化，經(jīng)單因素方差分析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

5、P<0.05)。(2)CD62E的變化：只在經(jīng)TNF-α 250IU/ml作用6h后細(xì)胞組在恩度作用24h時(shí)間段內(nèi)隨恩度濃度增加下調(diào)，單因素方差分析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余各組均無顯著性差導(dǎo)異(P>0.05)。 結(jié)論： 1、CD146是所有血管內(nèi)皮細(xì)胞所具有的共同標(biāo)記、可能分別表達(dá)在"靜止"和"活化"兩種內(nèi)皮細(xì)胞表面，高濃度的TNF“激活作用”也不能使其發(fā)生明顯變化。 2、CD105在僅經(jīng)生理濃度的血

6、清因子刺激后即可明顯上調(diào)、表達(dá)于具有增殖及粘附功能的內(nèi)皮細(xì)胞表面，可能至少反映了活化狀念中的增殖及粘附能力，對(duì)外界刺激反應(yīng)敏感、變化快，可能是反映內(nèi)皮細(xì)胞活化狀態(tài)的早期標(biāo)記。 3、CD62E只表達(dá)經(jīng)高于生理濃度的TNF激活的內(nèi)皮細(xì)胞表面、可能至少反映了活化狀態(tài)中粘附、遷移能力，且僅對(duì)外界高濃度刺激因子產(chǎn)生應(yīng)答、變化較慢，可能是反映內(nèi)皮細(xì)胞活化狀念的晚期標(biāo)記。 4、一定濃度的內(nèi)皮抑素可能不足以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，卻可以明顯抑