恩度聯(lián)合順鉑對荷瘤動物腫瘤血管正常化及循環(huán)血管內(nèi)皮細胞的影響.pdf

1、目的：
　　觀察重組人血管內(nèi)皮抑制素(rh-endostatin，商品名：恩度，endostar)導致荷瘤動物循環(huán)血管內(nèi)皮細胞(circulating endothelial cells，CECs)、腫瘤血管形態(tài)及血管生成相關因子的變化，闡明反應“血管正?；睍r間窗的標志物，比較在此時間窗內(nèi)及外實施化療的抗腫瘤效應、探索抗血管生成聯(lián)合化療的最佳用藥時間與順序。
　　方法：
　　單藥實驗隨機分為對照組(生理鹽水200ul

2、/d，第1～14天)、恩度組(恩度400ug/d，第1～14天)和順鉑組(順鉑4mg/kg/d，第1～5天)。聯(lián)合用藥實驗隨機分為對照組(生理鹽水200ul/d，第1～14天)、同時用藥組(恩度400ug/d，第1～14天；順鉑4mg/kg/d，第1～5天)、先恩度組(恩度400ug/d，第1～14天；順鉑4mg/kg/d，第5～9天)和先順鉑組(順鉑4mg/kg/d，第1～5天；恩度400ug/d，第6～19天)。動態(tài)測量移植瘤體積，

3、流式細胞術(shù)動態(tài)監(jiān)測CECs變化，激光共聚焦顯微鏡觀察微血管形態(tài)變化、Image Pro Plus6.0軟件統(tǒng)計血管滲漏面積、免疫組化方法檢測治療后EMMPRIN、VEGF、MMP2、MMP9、TIMP-1、TIMP-2、HIF-1α表達及微血管密度(MVD)、膠原覆蓋率的變化。
　　結(jié)果：
　　1.動物實驗結(jié)果：單藥恩度組(182.408 mm3±46.379 mm3)和單藥順鉑組(234.774mm3±59.588mm3)

4、治療前后腫瘤體積的差值均低于對照組。先恩度組對腫瘤生長抑制作用較其他聯(lián)合組更明顯。各組小鼠體重變化無明顯差異(P>0.05)。
　　2.流式細胞術(shù)檢測外周血CECs結(jié)果：與對照組比較，單藥恩度組aCECs用藥第7天升高(P=0.003)，第10天下降(P=0.026)；凋亡CECs第10天升高(P=0.033)。先恩度組和先順鉑組aCECs均較對照組降低。各聯(lián)合組凋亡CECs數(shù)量均較對照組升高。
　　3.微血管形態(tài)變化結(jié)果：

5、恩度治療第7天和第10天血管分枝較少、血管變直、血管密度下降、血管壁滲透性降低。
　　4.MVD及血管膠原覆蓋率的結(jié)果比較：恩度給藥第7天和第10天MVD降低、膠原覆蓋率增加。各聯(lián)合治療組MVD均降低、微血管膠原覆蓋率均增加。
　　5.免疫組化染色結(jié)果：恩度給藥第7天HIF-1α表達降低。EMMPRIN、VEGF、MMP-2和MMP-9的表達均于第4天明顯降低。TIMP-1和TIMP-2的表達于給藥第4天和第7天升高。先恩度

6、組及先順鉑組可降低HIF-1α表達。各聯(lián)合治療組均可下調(diào)EMMPRIN、VEGF、MMP-2和MMP-9的表達，上調(diào)TIMP-2的表達。
　　6.各指標間的相關性分析：HIF-1α，EMMPRJN，VEGF，MMPs，MVD之間存在正相關關系，HIF-1α與腫瘤體積呈正相關關系，VEGF，MMP-9及HIF-1α均與TIMP-1和TIMP-2呈負相關關系，腫瘤血管膠原覆蓋率與MVD，VEGF，HIF-1α，MMP-2及MMP-9呈

7、負相關關系，與TIMP-1及TIMP-2呈正相關關系。
　　結(jié)論：
　　恩度可以通過改變促血管生成因子與抗血管生成因子間的平衡，使腫瘤血管及其微環(huán)境在第4-10天實現(xiàn)短暫正常化，且在正?；瘯r間窗內(nèi)聯(lián)合使用化療藥物抗瘤作用最明顯；aCECs在血管正?；瘯r間窗內(nèi)表現(xiàn)為先上升后下降的過程，且在aCECs下降時凋亡CECs升高，aCECs早期升高可能提示新生血管床面積減小及血管正?；拈_始、繼而下降同時凋亡CECs升高反映腫瘤新生血