IVIg與HLA-E單克隆抗體TFL007抑制HLA抗體分泌的研究.pdf

1、靜脈注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin，IVIg)是腎移植術(shù)前高敏狀態(tài)患者脫敏療法的主要藥物之一，同時(shí)也應(yīng)用于治療腎移植術(shù)后抗體介導(dǎo)的排斥反應(yīng)，但其拮抗白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)抗體的機(jī)制目前尚不清楚。加之IVIg治療相當(dāng)昂貴，常受限于血漿來(lái)源短缺而臨床供應(yīng)不足，且往往因不同批號(hào)而表現(xiàn)不同的作用效果。因此，深入研究IVIg相關(guān)機(jī)制，最終生產(chǎn)出可充足供應(yīng)臨床的、效

2、果穩(wěn)定的、價(jià)格低廉的替代品是腎移植領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。
　　本論文從IVIg與HLA-E抗體的關(guān)系入手，從一個(gè)全新的視角對(duì)IVIg在腎移植臨床應(yīng)用的有效性做了合理推斷，并利用體外細(xì)胞培養(yǎng)體系證實(shí)了HLA-E單克隆抗體較IVIg有更好的抑制HLA抗體分泌的作用。論文的第一部分驗(yàn)證了IVIg和HLA-E抗體之間的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)，多種目前臨床上應(yīng)用的IVIg中均檢測(cè)到能與HLA Ia(A/B/Cw)類和Ib(E/F/G)類抗原結(jié)合的物質(zhì)

3、，且HLA Ib類抗原結(jié)合的滴度水平很高，提示IVIg中含有HLA抗體。進(jìn)一步我們吸附清除了IVIg中可能含有的HLA-E抗體，結(jié)果顯示IVIg之前所表現(xiàn)出的能與多種HLAⅠ類抗原結(jié)合的特征也隨之消失，這就表明IVIg中含有HLA-E抗體。而之前我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HLA-E抗體可以與HLA Ia類抗原起交叉結(jié)合反應(yīng)。這一發(fā)現(xiàn)就促使我們思考，既然HLA-E抗體可以模擬IVIg對(duì)HLA抗原的結(jié)合特征，那么它能否同樣具有抑制HLA抗體分泌的能

4、力呢？
　　為了驗(yàn)證我們的假說(shuō)，在論文的第二部分內(nèi)容中，我們建立了誘導(dǎo)外周血B細(xì)胞激活后分泌HLA抗體的體系。我們抽取外周血的健康志愿者，是一位因23年前妊娠導(dǎo)致同種異體HLA抗原致敏的女性。在缺乏致敏HLA抗原刺激的條件下，其外周血中的特異性同種異體HLAⅡ類抗體在持續(xù)存在了23年之后仍表現(xiàn)出較高的滴度水平，這提示其外周血中有特殊的長(zhǎng)壽記憶性B細(xì)胞的存在。我們比較了兩種激活純化B細(xì)胞的方案，根據(jù)兩套方案對(duì)漿細(xì)胞比例增加的統(tǒng)計(jì)學(xué)差

5、異及對(duì)HLA抗體分泌的趨勢(shì)差異，在后續(xù)的干預(yù)實(shí)驗(yàn)中選取了有白介素4參與的激活方案。
　　在論文的第三部分內(nèi)容中，我們利用在第二部分建立的誘導(dǎo)體外B細(xì)胞激活分泌HLAⅡ類抗體的體系，比較了IVIg和HLA-E單克隆抗體TFL007對(duì)同種異體HLA抗體分泌的抑制效果。我們發(fā)現(xiàn)，IVIg僅能抑制原發(fā)性同種異體HLA DRB1*0101抗體的分泌，但沒(méi)有對(duì)繼發(fā)性同種異體HLA DRB1*0102抗體產(chǎn)生有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的抑制作用。更重要的是，

6、其它4種繼發(fā)性同種異體HLA抗體在經(jīng)過(guò)IVIg干預(yù)處理之后，滴度水平較培養(yǎng)基對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的升高。而HLA-E單克隆抗體TFL007則表現(xiàn)出對(duì)所有分泌的HLAⅡ類抗體一致的抑制效果，且即使對(duì)原發(fā)性同種異體HLADRB1*0101抗體分泌的抑制強(qiáng)度也大于IVIg。我們隨后又利用從日本北海道紅十字會(huì)血液中心獲得的具有HLAⅠ類抗體分泌能力的永生化B細(xì)胞做了補(bǔ)充驗(yàn)證，該永生化B細(xì)胞來(lái)源于另一位因多次妊娠而產(chǎn)生HLAⅠ類抗體的女性健康志愿

7、者。結(jié)果顯示兩種不同制劑的IVIg均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)證據(jù)表明具有抑制HLAⅠ類抗體分泌的效果，而HLA-E單克隆抗體TFL007表現(xiàn)出了明顯的抑制HLAⅠ類抗體分泌的作用，且此抑制作用具有劑量效應(yīng)關(guān)系，高濃度的TFL007表現(xiàn)出的抑制作用最強(qiáng)，隨著濃度降低，抑制效果也隨之減弱。
　　本論文通過(guò)研究IVIg與HLA-E抗體的關(guān)系，從一個(gè)全新的視角對(duì)IVIg在腎移植臨床應(yīng)用的有效性做了合理推斷，并利用體外細(xì)胞培養(yǎng)體系證實(shí)了HLA-E單克隆抗