上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與神經(jīng)母細(xì)胞瘤缺氧環(huán)境下發(fā)生轉(zhuǎn)移機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究背景:
　　惡性實(shí)體腫瘤在生長(zhǎng)過(guò)程中由于腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)，使得血管的生長(zhǎng)呈現(xiàn)相對(duì)滯后性，因此腫瘤細(xì)胞本身多處于不同程度的缺氧狀態(tài)。神經(jīng)母細(xì)胞瘤早期出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其轉(zhuǎn)移機(jī)制仍不明確。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是癌細(xì)胞在缺氧微環(huán)境下發(fā)生轉(zhuǎn)移的主要途徑，但目前關(guān)于這一機(jī)制與神經(jīng)母細(xì)胞瘤的關(guān)系這方面研究較少。
　　目的:
　　探索上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化機(jī)制是否與缺氧環(huán)境下神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移有關(guān)，并明確其相關(guān)分子變化。
　　

2、方法:
　　1)隨機(jī)選取非轉(zhuǎn)移性神經(jīng)母細(xì)胞瘤（Ⅰ期）、未化療的轉(zhuǎn)移性神經(jīng)母細(xì)胞瘤（Ⅲ-Ⅳ期）、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤各5例，將這三種實(shí)體腫瘤標(biāo)本的石蠟切片用免疫組化的方法檢測(cè)E-cadherin與N-cadherin的表達(dá)變化。
　　2)將人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SK-N-SH置入缺氧培養(yǎng)箱(1％02，94％N2，5％C02)，建立腫瘤缺氧微環(huán)境并觀察細(xì)胞形態(tài)、通過(guò)檢測(cè)Caspase3/7及CCK-8檢測(cè)凋亡與增殖等基本細(xì)胞生物學(xué)變化。<

3、br>　　3) Transwell試驗(yàn)比較常氧與缺氧環(huán)境下腫瘤細(xì)胞的侵襲性變化
　　4) Real time-PCR及Western blot分別檢測(cè)常氧及缺氧環(huán)境下EMT系列基因表達(dá)的變化
　　結(jié)果:
　　1)免疫組化結(jié)果顯示:E-cadherin在轉(zhuǎn)移性神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)明顯低于Ⅰ期神經(jīng)母細(xì)胞瘤及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤(P=0.002，0.001)，N-cadherin在轉(zhuǎn)移性神經(jīng)母細(xì)胞瘤的表達(dá)明顯高于Ⅰ期神經(jīng)母細(xì)胞瘤及神

4、經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤(P=0.031，0.01)
　　2)與常氧組相比較，缺氧72h腫瘤細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯差異，凋亡明顯減少(P=0.01)，有加快增殖趨勢(shì)，但差異不明顯(P=0.061)。缺氧48h后VEGF表達(dá)明顯增加(P=0.042)
　　3) Transwell實(shí)驗(yàn)顯示缺氧24h后腫瘤細(xì)胞侵襲性增加(P=0.038)
　　4)缺氧24h內(nèi)E-cadherin表達(dá)明顯降低(P=0.011)，提示出現(xiàn)EMT變化，其他明顯表達(dá)增加