RECK及MMP-14在小兒神經母細胞瘤發(fā)生和轉移中作用機制的研究.pdf

1、第一部分： 目的：免疫組化法檢測基質金屬蛋白酶抑制劑RECK及膜型基質金屬蛋白酶MMP-14在神經母細胞瘤中的表達情況，探討其在神經母細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉移中的作用。 方法：選擇臨床及病理資料齊全的存檔神經母細胞瘤蠟塊標本36例，另取節(jié)細胞神經瘤蠟塊標本10例作對照.采用第二代通用型二步法監(jiān)測系統(tǒng)(PV-6000)免疫組化方法檢測RECK及MMP-14蛋白的表達。 結果：RECK在神經母細胞瘤組織中低表達

2、(16.7％)，并隨腫瘤浸潤深度的加深、遠隔轉移的發(fā)生、臨床分期的提高而降低(P<0.05).MMP-14在神經母細胞瘤組織中高表達(58.3％)，并隨腫瘤浸潤深度的加深、臨床分期的提高而增高(P<0.05).神經母細胞瘤組織中RECK與MMP-14的表達呈負相關(r=-0.418，P<0.05)。 結論：神經母細胞瘤組織中RECK低表達，MMP-14高表達.RECK及MMP-14可能成為評估神經母細胞瘤發(fā)生浸潤轉移的重要指標。

3、 第二部分： 目的：通過選取神經母細胞瘤患者新鮮腫瘤標本建立的人神經母細胞瘤體外細胞系，建立起不同濃度的細胞懸液，將其接種裸鼠，建立神經母細胞瘤荷瘤裸鼠模型，進一步建立裸鼠原位荷瘤及轉移瘤細胞系，為下一步的實驗做好細胞的準備工作。 方法：應用自建的神經母細胞瘤體外細胞系。無菌條件下，將處于對數生長期的人神經母細胞瘤細胞用酶消化法制備成單細胞懸液，接種于裸鼠單側脅腹皮下，共接種14只，數日后觀察裸鼠致瘤情況，解剖荷

4、瘤鼠，原代培養(yǎng)法建立裸鼠原位荷瘤細胞系及轉移瘤細胞系，將細胞放入DMEM培養(yǎng)液，補加10％胎牛血清及青、鏈霉素，置于37℃、5％C02、100％濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，為下一步試驗做好細胞準備。結果：裸鼠一共致瘤10只，其中單側皮下致瘤5只，雙側腹膜后致瘤2只，全身轉移的裸鼠3只（均有明顯的肝臟轉移和惡液質體征），通過原代培養(yǎng)法建立起裸鼠原位荷瘤細胞系及轉移瘤細胞系，細胞染色較深，形狀不規(guī)則，細胞呈小梭形，部分呈淚滴狀，少數呈三角形

5、，菊團狀生長，分化低，細胞核大、深染，電鏡下可見含有縱行排列的微小管的外圍齒狀突起，有致密核心的有包膜兒茶酚胺小圓顆粒。 結論：我們成功建立神經母細胞瘤荷瘤裸鼠模型，并成功建立裸鼠原位荷瘤及轉移瘤細胞系，證實我們自己建立的神經母細胞瘤細胞系具有局部致瘤及轉移特性，說明細胞系中存在具有轉移潛性的細胞亞群，為進一步探討神經母細胞瘤轉移機制奠定基礎，并為下一步通過RT-PCR法檢測神經母細胞瘤轉移相關基因表達差異創(chuàng)造了良好的開端。

6、 第三部分： 目的：檢測自建的裸鼠原位荷瘤細胞系及轉移瘤細胞系中RECK及MMP-14mRNA的表達，比較裸鼠兩種細胞中二者的表達差異及臨床意義。 方法：應用RT-PCR法檢測自建裸鼠原位荷瘤細胞及轉移瘤細胞中RECK及MMP-14mRNA的表達。 結果：裸鼠原位荷瘤細胞中RECK mRNA的表達較裸鼠轉移瘤細胞中的表達明顯增高(t=3.012，p<0.05)，MMP-14mRNA在裸鼠原位荷瘤細胞中的表達則