RECK及MMP-14在小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移中作用機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分： 目的：免疫組化法檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑RECK及膜型基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-14在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況，探討其在神經(jīng)母細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用。 方法：選擇臨床及病理資料齊全的存檔神經(jīng)母細(xì)胞瘤蠟塊標(biāo)本36例，另取節(jié)細(xì)胞神經(jīng)瘤蠟塊標(biāo)本10例作對(duì)照.采用第二代通用型二步法監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(PV-6000)免疫組化方法檢測(cè)RECK及MMP-14蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：RECK在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中低表達(dá)

2、(16.7％)，并隨腫瘤浸潤(rùn)深度的加深、遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移的發(fā)生、臨床分期的提高而降低(P<0.05).MMP-14在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中高表達(dá)(58.3％)，并隨腫瘤浸潤(rùn)深度的加深、臨床分期的提高而增高(P<0.05).神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中RECK與MMP-14的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.418，P<0.05)。 結(jié)論：神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中RECK低表達(dá)，MMP-14高表達(dá).RECK及MMP-14可能成為評(píng)估神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。

3、 第二部分： 目的：通過(guò)選取神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者新鮮腫瘤標(biāo)本建立的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤體外細(xì)胞系，建立起不同濃度的細(xì)胞懸液，將其接種裸鼠，建立神經(jīng)母細(xì)胞瘤荷瘤裸鼠模型，進(jìn)一步建立裸鼠原位荷瘤及轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系，為下一步的實(shí)驗(yàn)做好細(xì)胞的準(zhǔn)備工作。 方法：應(yīng)用自建的神經(jīng)母細(xì)胞瘤體外細(xì)胞系。無(wú)菌條件下，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞用酶消化法制備成單細(xì)胞懸液，接種于裸鼠單側(cè)脅腹皮下，共接種14只，數(shù)日后觀察裸鼠致瘤情況，解剖荷

4、瘤鼠，原代培養(yǎng)法建立裸鼠原位荷瘤細(xì)胞系及轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系，將細(xì)胞放入DMEM培養(yǎng)液，補(bǔ)加10％胎牛血清及青、鏈霉素，置于37℃、5％C02、100％濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，為下一步試驗(yàn)做好細(xì)胞準(zhǔn)備。結(jié)果：裸鼠一共致瘤10只，其中單側(cè)皮下致瘤5只，雙側(cè)腹膜后致瘤2只，全身轉(zhuǎn)移的裸鼠3只（均有明顯的肝臟轉(zhuǎn)移和惡液質(zhì)體征），通過(guò)原代培養(yǎng)法建立起裸鼠原位荷瘤細(xì)胞系及轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系，細(xì)胞染色較深，形狀不規(guī)則，細(xì)胞呈小梭形，部分呈淚滴狀，少數(shù)呈三角形

5、，菊?qǐng)F(tuán)狀生長(zhǎng)，分化低，細(xì)胞核大、深染，電鏡下可見(jiàn)含有縱行排列的微小管的外圍齒狀突起，有致密核心的有包膜兒茶酚胺小圓顆粒。 結(jié)論：我們成功建立神經(jīng)母細(xì)胞瘤荷瘤裸鼠模型，并成功建立裸鼠原位荷瘤及轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系，證實(shí)我們自己建立的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系具有局部致瘤及轉(zhuǎn)移特性，說(shuō)明細(xì)胞系中存在具有轉(zhuǎn)移潛性的細(xì)胞亞群，為進(jìn)一步探討神經(jīng)母細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制奠定基礎(chǔ)，并為下一步通過(guò)RT-PCR法檢測(cè)神經(jīng)母細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)差異創(chuàng)造了良好的開(kāi)端。

6、 第三部分： 目的：檢測(cè)自建的裸鼠原位荷瘤細(xì)胞系及轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系中RECK及MMP-14mRNA的表達(dá)，比較裸鼠兩種細(xì)胞中二者的表達(dá)差異及臨床意義。 方法：應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)自建裸鼠原位荷瘤細(xì)胞及轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞中RECK及MMP-14mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：裸鼠原位荷瘤細(xì)胞中RECK mRNA的表達(dá)較裸鼠轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯增高(t=3.012，p<0.05)，MMP-14mRNA在裸鼠原位荷瘤細(xì)胞中的表達(dá)則