遺傳性腦海綿狀血管瘤家系永生細(xì)胞株的建立與保存.pdf

1、目前，利用EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)轉(zhuǎn)化外周血B-淋巴細(xì)胞建立遺傳性疾病或其他罕見(jiàn)疾病永生細(xì)胞庫(kù)已成為永久保存疾病個(gè)體遺傳資源的首選方法。該方法可為遺傳性疾病或其他罕見(jiàn)疾病的遺傳流行病學(xué)、臨床遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等研究提供永久性實(shí)驗(yàn)材料，為后續(xù)研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 腦海綿狀血管瘤(CerebralCavernousMalformations，CCM)是一種常見(jiàn)的多發(fā)病，臨床上可分為家族性遺傳和散發(fā)性病例兩

2、大類(lèi)，病灶多位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的各個(gè)部位，伴有經(jīng)常性出血等癥狀。家族性腦海綿狀血管瘤以常染色體顯性方式遺傳，該病發(fā)病率高，病因復(fù)雜，對(duì)它的研究已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)和分子遺傳學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。 本研究即利用EBV轉(zhuǎn)化技術(shù)，成功建立了一個(gè)CCM遺傳家系的永生細(xì)胞株，完整的保留了該疾病的遺傳資源，并為今后進(jìn)一步研究該病的發(fā)病機(jī)制和建立治療方案奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。具體研究?jī)?nèi)容如下： 1.比較了利用EBV建立永生細(xì)胞株的環(huán)胞霉素A(CyA

3、)處理法、微量全血法和凍存全血法在建株成功率和所需時(shí)間長(zhǎng)短方面的差異，最終選擇并確定了建株成功率高、所用時(shí)間較短的EBV加CyA處理法作為建立永生細(xì)胞株的最佳方法。 2.在常規(guī)染色體G顯帶技術(shù)的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)影響分裂相數(shù)目、染色體長(zhǎng)度、分散程度和帶紋顯示的相關(guān)條件進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，確定了針對(duì)永生細(xì)胞染色體G顯帶的最佳條件：PHA終濃度為0.1mg/mL，作用時(shí)間為48h，秋水仙素終濃度為0.04μg/mL，從而為人永生淋巴細(xì)胞株的鑒定