心水通復(fù)方水提物對(duì)缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞AQPs影響的研究.pdf

1、目的:
　　通過借助體外細(xì)胞，研究心水通復(fù)方水提物對(duì)AQPs基因、蛋白表達(dá)與細(xì)胞線粒體和病理形態(tài)變化之間的關(guān)系，試圖揭示該組方防治CHF的作用機(jī)制。
　　方法:
　　通過體外缺氧再?gòu)?fù)氧誘導(dǎo)人心肌細(xì)胞，不同濃度心水通復(fù)方水提物干預(yù)人心肌細(xì)胞。運(yùn)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、激光共聚焦、細(xì)胞特殊染色、Real-time PCR、細(xì)胞免疫組織化學(xué)法和Western blot法，檢測(cè)細(xì)胞活性、細(xì)胞損傷和線粒體的變化，以及AQP-1、

2、4、7基因和蛋白的表達(dá)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、MTT法結(jié)果顯示，與模型組相比心水通復(fù)方水提物干預(yù)組中XST-200和XST-400組的細(xì)胞存活率高于模型組，具有顯著性差異(p＜0.05）。
　　2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)線粒體膜電位變化及激光共聚焦觀察JC-1染色結(jié)果顯示，模型組細(xì)胞線粒體膜電位明顯降低，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.05）。心水通復(fù)方水提物組中XST-400組線粒體膜電位高于模型組且有顯著性差異

3、（P＜0.05）。
　　3、Lysotracker Red染色結(jié)果顯示，模型組溶酶體紅色光比值明顯降低，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.05)。心水通復(fù)方水提物組中XST-400與XST-600組紅色光比值均高于模型組，與模型組相比均有顯著性差異（P＜0.05）。
　　4、Real-time PCR結(jié)果顯示，缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞模型組AQP-1、4、7mRNA表達(dá)比正常組顯著增高（P＜0.05）。在心水通復(fù)方水提物200μ

4、g/ml～600μ g/ml范圍內(nèi)，AQP-1mRNA的表達(dá)水平隨著濃度增加而增高;而在XST-400μg/ml，AQP-4、7mRNA的表達(dá)明顯比200μ g/ml和600μg/ml降低(P＜0.05)，其原因有待進(jìn)一步研究。
　　5、細(xì)胞免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在人心肌細(xì)胞中均可以檢測(cè)到AQP-1、4、7蛋白的表達(dá)。經(jīng)過缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞模型組中AQP-1、4、7蛋白表達(dá)上調(diào)，模型組陽性細(xì)胞較正常對(duì)照組增多，且模型組積分光密度

5、高于正常對(duì)照組（P＜0.05）。在心水通水提物XST-200和XST-400干預(yù)組中，AQP-1的陽性細(xì)胞數(shù)比模型組少，其積分光密度比模型組低(P＜0.05）。提示:XST在濃度為200-400μg/ml能夠顯著下調(diào)缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞的AQP-1蛋白表達(dá)(P＜0.05)。而XST-400干預(yù)組的AQP-4、7的陽性細(xì)胞數(shù)量與積分光密度比模型組的陽性細(xì)胞減少。說明XST400μg/ml能夠顯著下調(diào)缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞AQP-4、7蛋白的表達(dá)（P

6、＜0.05）。
　　6、Western blot結(jié)果顯示，缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞模型組中AQP-1、4、7蛋白的表達(dá)均上調(diào)。心水通水提物能劑量依賴性地上調(diào)缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞AQP-1的表達(dá)，XST-600μg/ml能將AQP-1的蛋白表達(dá)恢復(fù)到接近正常對(duì)照組水平。XST-400組能夠顯著下調(diào)AQP-4、7蛋白的表達(dá)（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.心水通復(fù)方水提物能提高缺氧誘導(dǎo)人心肌細(xì)胞的耐受，能增強(qiáng)細(xì)胞的存活率

7、，對(duì)缺氧誘導(dǎo)細(xì)胞具有較好的保護(hù)作用;
　　2.心水通復(fù)方水提物通過穩(wěn)定線粒體膜電位和穩(wěn)定溶酶體，減緩線粒體氧化應(yīng)激性損傷和維持溶酶體酶的活性，可能是保護(hù)心肌細(xì)胞缺氧再?gòu)?fù)氧性損傷的機(jī)制之一;
　　3.人心肌細(xì)胞經(jīng)過缺氧再?gòu)?fù)氧后AQP-1、4、7基因與蛋白表達(dá)上調(diào);
　　4.心水通復(fù)方水提物不同濃度干預(yù)缺氧再?gòu)?fù)氧人心肌細(xì)胞，對(duì)AQP-1、4、7基因和蛋白表達(dá)均有不同影響。AQP-1呈劑量依賴性增高，而AQP-4、7的表達(dá)與