黃芪藥材中毛蕊異黃酮苷的提取及測(cè)定方法研究.pdf

1、黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge.) Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。黃芪一般在霜降前后地上部分枯萎時(shí)，或春季土壤解凍后植株萌芽前采挖，除去泥沙，去凈殘莖、須根，切下蘆頭，平鋪于曬場(chǎng)進(jìn)行晾曬，以曬至干透為度。目前市場(chǎng)上應(yīng)用的黃芪多為栽培品，具有補(bǔ)氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生

2、肌等功效，廣泛用于多種中成藥及其制劑中。黃芪的主要有效成分為皂苷、黃酮、多糖等。黃芪中黃酮類等成分具有顯著的抗氧化、促進(jìn)細(xì)胞增殖作用。異黃酮類化合物具有雌激素樣作用，黃芪異黃酮為黃芪的有效成分之一，有抗病毒、抗菌、降血脂、抗氧自由基等作用。
　　目的:通過試驗(yàn)對(duì)黃芪藥材進(jìn)行研究，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制黃芪的質(zhì)量提供依據(jù)。
　　方法:含量測(cè)定方法的建立(1)提取條件:利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，從溶劑用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)及不同溶劑的選

3、用幾個(gè)方面，對(duì)黃芪藥材中毛蕊異黃酮的含量測(cè)定進(jìn)行考察，選取適宜黃芪藥材提取工藝。(2)色譜條件:選擇合適的固定相、流動(dòng)相、柱溫等使毛蕊異黃酮苷色譜峰與其它雜質(zhì)峰完全分離。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn):在第(2)步確定的色譜條件下，考察毛蕊異黃酮苷色譜峰的理論板數(shù)、分離度。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:配制梯度濃度的毛蕊異黃酮對(duì)照品溶液，在選定的色譜條件下分別進(jìn)樣，根據(jù)不同濃度的對(duì)照品和各自對(duì)應(yīng)的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(5)精密度試驗(yàn):分別量取對(duì)照品溶液和

4、供試品溶液按進(jìn)樣量2μl/次，各自連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定樣品峰面積。(6)重復(fù)性試驗(yàn):稱取6份同批次黃芪藥材粉末，制備供試品溶液，按進(jìn)樣量2μl/次，測(cè)定樣品峰面積。(7)穩(wěn)定性試驗(yàn):配置對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別于放置0，4，8，12，24，48h后進(jìn)樣，測(cè)定樣品峰面積。(8)回收率試驗(yàn):稱取幾份黃芪藥材粉末樣品，并計(jì)算各黃芪藥材粉末中毛蕊異黃酮苷總量，分別加入等量的毛蕊異黃酮苷對(duì)照品，測(cè)定毛蕊異黃酮苷的含量，計(jì)算平均回收率和RSD值。

5、(9)最低限檢測(cè)的測(cè)定:逐步稀釋毛蕊異黃酮苷對(duì)照品溶液，直到信噪比S/N≥3，此時(shí)的毛蕊異黃酮苷含量即為該方法的最低檢測(cè)限。
　　結(jié)果:(1)提取條件:確定了對(duì)黃芪進(jìn)行含量測(cè)定的前處理工藝:50倍甲醇超聲提取一次，提取時(shí)間為30 min。(2)色譜條件:采用Waters C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.8μm);流動(dòng)相:甲醇:0.1％甲酸水溶液，梯度洗脫;流速:0.3 ml/min;柱溫設(shè)定為40℃;檢測(cè)波長設(shè)定為2

6、68nm;進(jìn)樣量:2μl。在此色譜條件下，毛蕊異黃酮苷峰保留時(shí)間約為6min，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)不低于4000。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:經(jīng)檢測(cè)毛蕊異黃酮苷在0.0276～2.76μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。回歸方程為Y=317194X+12502，r=0.9999。(4)精密度試驗(yàn):儀器和方法的精密度良好，RSD分別為2.43％、3.61％。(5)重復(fù)性試驗(yàn):樣品的重復(fù)性良好，RSD為0.64％。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):對(duì)照品和樣品在48