雷帕霉素-CD96免疫膠束的制備及表征與靶向性初步分析.pdf

1、目的：制備雷帕霉素-CD96免疫膠束并對其進行表征分析，體外探討免疫膠束對HL-60細胞的靶向特異性。
　　方法：比較成膜法和溶劑蒸發(fā)法制備膠束的優(yōu)劣；采用正交設計對制備處方進行優(yōu)化，篩選出最佳制備工藝；動態(tài)激光散射儀檢測徑粒、分布和zeta電位；芘熒光探針光譜法測定臨界膠束濃度；紫外分光光度法測定載藥膠束的包封率和載藥量，并考察此法測定雷帕霉素含量的精密度和適用性。在篩選出載藥膠束最佳制備工藝的基礎上，將CD96單抗與Mal-P

2、EG-DSPE和載藥膠束相連接，制備雷帕霉素-CD96免疫膠束；將制備好的空白膠束、載藥膠束、免疫載藥膠束置于4℃條件下冷藏保存，每隔一段時間重新測量一次粒徑、zeta電位和包封率，觀察膠束溶液的穩(wěn)定性；通過WST-8法測定3種膠束對急性髓系白血病HL-60細胞的殺傷作用，初步分析其靶向特異性。
　　結果：成膜法制備的膠束粒徑較大且分布不均一，呈多峰分布，粒徑在413nm左右。而溶劑蒸發(fā)法制備的膠束粒徑分布窄，分散性好。溶劑蒸發(fā)法

3、制備的空白膠束、載藥膠束、免疫載藥膠束的平均粒徑分別為62.8、78.2和103.1nm，zeta電位分別為-15.8、-20.2和-20.6mv。因此，后續(xù)實驗采用溶劑蒸發(fā)法制備膠束。正交試驗篩選出的最佳處方是有機相/水相體積比為1:10，藥物和嵌段材料質量比為1:10，藥物在有機溶劑中的濃度為1mg/mL，水相（PBS）pH值為7，即二氯甲烷1mL、PBS10mL、PBS的pH=7、雷帕霉素1mg、mPEG-PLA10mg。芘熒光探

4、針法測得臨界膠束濃度為3.16mg/L，紫外分光光度法測得包封率為51.3％，載藥量為5.13%，此法的精密度和加樣回收率符合驗收標準。3種膠束在4℃條件下保存穩(wěn)定性良好。WST-8結果顯示細胞處理24小時后，藥物濃度為0.01μg/mL時對細胞的毒性無顯著性差異，但當濃度高于0.1μg/mL時雷帕霉素-CD96免疫膠束組和雷帕霉素膠束組對細胞的毒性作用均強于雷帕霉素溶液組（P<0.05），且免疫膠束組與相對應濃度的普通膠束組相比亦有顯

5、著性差異（P<0.05）。細胞處理48小時后，從濃度0.01μg/mL開始，3種藥物即對HL-60細胞有殺傷作用，效應趨勢與24小時時相同。
　　結論：
　　1.采用溶劑蒸發(fā)法成功制備了膠束、雷帕霉素膠束和雷帕霉素-CD96免疫膠束，并篩選出最優(yōu)處方。
　　2．分析了雷帕霉素膠束和雷帕霉素-CD96免疫膠束的表征和穩(wěn)定性。
　　3．雷帕霉素膠束和雷帕霉素-CD96免疫膠束具有靶向性，免疫載藥膠束的主動靶向性更強。