(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)評(píng)價(jià)藥物治療真菌性角膜潰湯療效的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立兔感染茄病鐮刀菌的真菌性角膜炎模型，監(jiān)測(cè)模型眼不同時(shí)期淚液中(1，3)-β-D-葡聚糖的濃度變化，結(jié)合病變角膜組織中菌絲負(fù)荷及角膜潰瘍臨床評(píng)分進(jìn)行分析，討論(1，3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)評(píng)價(jià)真菌性角膜炎動(dòng)物模型的可行性;通過(guò)藥物治療真菌性角膜炎動(dòng)物模型，觀察(1，3)-β-D-葡聚糖在真菌性角膜炎愈合過(guò)程中的濃度變化，進(jìn)一步討論(1，3)-β-D-葡聚糖評(píng)價(jià)藥物治療真菌性角膜炎療效的應(yīng)用，為探索一種真菌性角膜炎無(wú)創(chuàng)篩查和定量評(píng)

2、價(jià)手段提供理論依據(jù)。
　　 方法:1.新西蘭大耳白兔32只，隨機(jī)選取16只為實(shí)驗(yàn)組，16只為陰性對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組采用角膜劃痕法接種標(biāo)準(zhǔn)茄病鐮刀菌株，制作真菌性角膜炎動(dòng)物模型，陰性對(duì)照組接種生理鹽水。均為右眼接種，左眼為正常對(duì)照組。每日行裂隙燈顯微鏡檢查，于病程第3、7、15、21天進(jìn)行臨床評(píng)分，并分別收集三組淚液10μL行(1，3)-β-D-葡聚糖濃度檢測(cè)。分別于上述各時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選取實(shí)驗(yàn)組4只、陰性對(duì)照組4只經(jīng)耳緣靜脈栓塞處死后，

3、留取角膜組織行組織病理學(xué)檢查。觀察病情進(jìn)展情況。
　　 2.新西蘭大耳白兔42只，按第一部分的方法，接種茄病鐮刀菌，均為右眼接種。從42只兔真菌性角膜炎模中挑選臨床評(píng)分接近的36只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為治療組18只、對(duì)照組18只。治療組自成模后第1天即予5％那他霉素滴眼液點(diǎn)眼，對(duì)照組不予干預(yù)。分別于治療前，治療第3、5、10、15、21天收集患眼淚液行(1，3)-β-D-葡聚糖濃度檢測(cè)，并于上述相同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選取治療組3只、對(duì)照組3

4、只處死后留取角膜組織，以角膜潰瘍?yōu)橹行姆肿鲀煞?，一份行組織病理學(xué)檢查，一份置于經(jīng)高壓消毒的EP管中用于MMP-9蛋白Western-blot檢測(cè)。觀察抗真菌藥物治療療效。
　　 結(jié)果:1.兔感染茄病鐮刀菌性角膜炎模型建立成功，成功率100％。病程第3、7、15、21天，實(shí)驗(yàn)組淚液中(1，3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(656.32±97.63) pg/mL、(858.29±96.26)pg/mL、(1047.49±105.36)

5、 pg/mL、(1679.47±124.42) pg/mL，而正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)葡聚糖濃度全部穩(wěn)定于20pg/mL以下，顯著低于實(shí)驗(yàn)組（F=69.05，P＜0.01）。從實(shí)驗(yàn)組(1，3)-β-D-葡聚糖濃度的變化來(lái)看，隨著真菌性角膜炎病情的進(jìn)展，(1，3)-β-D-葡聚糖濃度隨之升高，而角膜組織中真菌負(fù)荷未增高，甚至有減少趨勢(shì)。
　　 2.治療組治療第3、5、10、15、21天(1，3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(4

6、38.38±79.58) pg/mL、(194.39±23.54) pg/mL、(106.54±19.87)(58.36±10.39) pg/mL，(16.27±3.42) pg/mL;而對(duì)照組在病程第3天時(shí)濃度為(554.56±92.26) pg/mL，隨后逐日升高，至21天時(shí)升至(1894.47±156.47) pg/mL，兩組間各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)濃度差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=217.65，227.96，P＜0.01）。角膜組織中MMP

7、-9 Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，治療前，兩組MMP-9蛋白均有表達(dá)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（T=1.358，P＞0.05）;至治療15、21天，對(duì)照組蛋白表達(dá)量明顯增加，而治療組無(wú)升高，甚至開(kāi)始下降，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(T=9.396,25.475，P＜0.01)。
　　 結(jié)論:1.淚液中(1，3)-β-D-葡聚糖濃度與真菌性角膜炎臨床評(píng)分有相關(guān)性，能夠定量評(píng)價(jià)角膜真菌感染的嚴(yán)重程度，較臨床評(píng)分等半定量評(píng)價(jià)手段更優(yōu);角膜