MicroRNAs對秀麗線蟲固有免疫的系統(tǒng)調控研究.pdf

1、近年來，越來越多的證據顯示microRNAs(miRNAs)在固有免疫調控方面扮演了重要角色。下調的miRNA分子和多種疾病有關，如:癌癥，炎癥反應和免疫失調。靶基因預測分析顯示了至少一半以上固有免疫基因受到miRNAs的直接調控，但是miRNA調控固有免疫的分子機制還具有其探討性。本研究利用模式動物秀麗線蟲為研究對象，在81種miRNA突變體的基礎上，通過在感染綠膿桿菌Pseudomonasaeruginosa(PA14)這種常見致病

2、菌后的免疫情況來篩選出與秀麗線蟲固有免疫相關的microRNA。
　　將同步化后到達L4時期的秀麗線蟲轉移到含有綠膿桿菌(PA14)的瓊脂培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)進行實驗。利用一些指標如壽命長短，秀麗線蟲體內抗菌肽變化情況等來初篩對秀麗線蟲固有免疫有影響的microRNA，再利用雙突變等試驗方法來研究篩選出的miRNA與已知固有免疫信號通路的關系來進行探討。
　　研究結果顯示:從已有的的81種microRNA突變體秀麗

3、線蟲中初篩出了24種表現出抗性的miRNA突變體秀麗線蟲和11種表現出敏感的miRNA突變體秀麗線蟲，表明這35種miRNA可能與秀麗線蟲固有免疫相關。接下來發(fā)現這35種miRNA突變體秀麗線蟲中有7種參與調控秀麗線蟲的壽命。RT-PCR顯示初篩后表現出抗性的miRNA突變體秀麗線蟲let-7(n2853)，mir-45(n4280)，mir-60(n4974)，mir-79(n4126)，mir-84(n4037)，mir-355(n

4、4618)在感染綠膿桿菌后體內抗菌肽顯著上調表達。RT-PCR也顯示初篩后從表現出敏感的miRNA突變體秀麗線蟲mir-70(n4109)，mir-73&74(ndf47)，mir-85(n4117)，mir-233(n4761)，mir-360(n4635)在感染綠膿桿菌后體內抗菌肽顯著下調表達。同時RT-PCR分析了突變體秀麗線蟲let-7(n2853),mir-60(n4974),mir-79(n4126),mir-84(n403

5、7),mir-355(n4618), mir-73&74(ndf47)，mir-233(n4761)與已知免疫信號通路之中主要基因，發(fā)現這些miRNAs在一定程度上參與調控了這些免疫基因，推測這些miRNAs也參與調控了已知的固有免疫信號通路。接下來突變體秀麗線蟲mir-60(n4974)和mir-233(n4761)與p38 MAPK免疫信號通路、Toll樣免疫信號通路(Toll-like)、TGF-β免疫信號通路、胰島素免疫信號通路

6、(Insulin signaling)這四種免疫信號通路中的關鍵基因pmk-1、tol-1、dbl-1、daf-16進行雙突變實驗，實驗結果表明突變體秀麗線蟲由于缺乏mir-60在綠膿桿菌侵染時表現出的抗性表型被恢復到野生型水平;而突變體秀麗由于缺乏mir-233在綠膿桿菌侵染時表現出的敏感表型被放大。
　　總之，本實驗證明了microRNA分子確實參與了秀麗線蟲固有免疫調控，鑒定了可能參與固有免疫的可能miRNA遺傳位點，且這些