MicroRNAs對(duì)秀麗線蟲(chóng)固有免疫的系統(tǒng)調(diào)控研究.pdf

1、近年來(lái)，越來(lái)越多的證據(jù)顯示microRNAs(miRNAs)在固有免疫調(diào)控方面扮演了重要角色。下調(diào)的miRNA分子和多種疾病有關(guān)，如:癌癥，炎癥反應(yīng)和免疫失調(diào)。靶基因預(yù)測(cè)分析顯示了至少一半以上固有免疫基因受到miRNAs的直接調(diào)控，但是miRNA調(diào)控固有免疫的分子機(jī)制還具有其探討性。本研究利用模式動(dòng)物秀麗線蟲(chóng)為研究對(duì)象，在81種miRNA突變體的基礎(chǔ)上，通過(guò)在感染綠膿桿菌Pseudomonasaeruginosa(PA14)這種常見(jiàn)致病

2、菌后的免疫情況來(lái)篩選出與秀麗線蟲(chóng)固有免疫相關(guān)的microRNA。
　　將同步化后到達(dá)L4時(shí)期的秀麗線蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到含有綠膿桿菌(PA14)的瓊脂培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。利用一些指標(biāo)如壽命長(zhǎng)短，秀麗線蟲(chóng)體內(nèi)抗菌肽變化情況等來(lái)初篩對(duì)秀麗線蟲(chóng)固有免疫有影響的microRNA，再利用雙突變等試驗(yàn)方法來(lái)研究篩選出的miRNA與已知固有免疫信號(hào)通路的關(guān)系來(lái)進(jìn)行探討。
　　研究結(jié)果顯示:從已有的的81種microRNA突變體秀麗

3、線蟲(chóng)中初篩出了24種表現(xiàn)出抗性的miRNA突變體秀麗線蟲(chóng)和11種表現(xiàn)出敏感的miRNA突變體秀麗線蟲(chóng)，表明這35種miRNA可能與秀麗線蟲(chóng)固有免疫相關(guān)。接下來(lái)發(fā)現(xiàn)這35種miRNA突變體秀麗線蟲(chóng)中有7種參與調(diào)控秀麗線蟲(chóng)的壽命。RT-PCR顯示初篩后表現(xiàn)出抗性的miRNA突變體秀麗線蟲(chóng)let-7(n2853)，mir-45(n4280)，mir-60(n4974)，mir-79(n4126)，mir-84(n4037)，mir-355(n

4、4618)在感染綠膿桿菌后體內(nèi)抗菌肽顯著上調(diào)表達(dá)。RT-PCR也顯示初篩后從表現(xiàn)出敏感的miRNA突變體秀麗線蟲(chóng)mir-70(n4109)，mir-73&74(ndf47)，mir-85(n4117)，mir-233(n4761)，mir-360(n4635)在感染綠膿桿菌后體內(nèi)抗菌肽顯著下調(diào)表達(dá)。同時(shí)RT-PCR分析了突變體秀麗線蟲(chóng)let-7(n2853),mir-60(n4974),mir-79(n4126),mir-84(n403

5、7),mir-355(n4618), mir-73&74(ndf47)，mir-233(n4761)與已知免疫信號(hào)通路之中主要基因，發(fā)現(xiàn)這些miRNAs在一定程度上參與調(diào)控了這些免疫基因，推測(cè)這些miRNAs也參與調(diào)控了已知的固有免疫信號(hào)通路。接下來(lái)突變體秀麗線蟲(chóng)mir-60(n4974)和mir-233(n4761)與p38 MAPK免疫信號(hào)通路、Toll樣免疫信號(hào)通路(Toll-like)、TGF-β免疫信號(hào)通路、胰島素免疫信號(hào)通路

6、(Insulin signaling)這四種免疫信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因pmk-1、tol-1、dbl-1、daf-16進(jìn)行雙突變實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明突變體秀麗線蟲(chóng)由于缺乏mir-60在綠膿桿菌侵染時(shí)表現(xiàn)出的抗性表型被恢復(fù)到野生型水平;而突變體秀麗由于缺乏mir-233在綠膿桿菌侵染時(shí)表現(xiàn)出的敏感表型被放大。
　　總之，本實(shí)驗(yàn)證明了microRNA分子確實(shí)參與了秀麗線蟲(chóng)固有免疫調(diào)控，鑒定了可能參與固有免疫的可能miRNA遺傳位點(diǎn)，且這些