白藜蘆醇在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的抗凋亡作用與Sitr1-p53通路的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　 白藜蘆醇是第Ⅲ類組蛋白/非組蛋白去乙?；窼irt1的激動(dòng)劑，并能降低遭受缺血再灌注損傷時(shí)的心肌細(xì)胞凋亡。本研究的目的在于分析白藜蘆醇的抑制心肌細(xì)胞凋亡作用與Sirt1-p53通路的關(guān)系，以期揭示白藜蘆醇心肌保護(hù)作用的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 48只清潔級(jí)雄性SD大鼠，10～13周齡，體重200～250g，隨機(jī)分為4組(n=12):缺血再灌注組（IR組）、白藜蘆醇預(yù)處理+缺血再灌注組（RES+

2、IR組）、白藜蘆醇預(yù)處理+Sia1抑制劑EX527+缺血再灌注組（RES+EX+IR組）和Sirt1抑制劑EX527+缺血再灌注組(EX+IR組)。采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支(left anterior descendingcoronary artery，LAD)45分鐘，再灌注120分鐘的方法建立大鼠心肌缺血再灌注實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?1) IR組:在冠狀動(dòng)脈左前降支下穿線并結(jié)扎45分鐘，導(dǎo)致急性心肌缺血，剪開結(jié)扎線使心肌再灌注120分鐘以建立心

3、肌缺血再灌注損傷模型。結(jié)扎前15分鐘經(jīng)舌下靜脈注入DMSO和PBS混合液(DMSO∶ PBS=1∶1)1ml，平衡溶劑的影響。(2) RES+IR組:建立心肌缺血再灌注損傷模型，分別在結(jié)扎前15分鐘經(jīng)舌下靜脈注入白藜蘆醇20mg/kg（溶液體積1ml）。(3) RES+EX+IR組:建立心肌缺血再灌注損傷模型，分別在結(jié)扎前15分鐘經(jīng)舌下靜脈注入白藜蘆醇20mg/kg和EX5271 ug/kg（溶液總體積1ml）。(4)EX+IR組:建立

4、心肌缺血再灌注損傷模型，分別在結(jié)扎前15分鐘經(jīng)舌下靜脈注入EX527 lug/kg（溶液體積1ml）。實(shí)驗(yàn)處理完成后，采集心肌組織標(biāo)本，采用TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率;采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)心肌組織中促凋亡蛋白BAX的表達(dá);采用Western blot法檢測(cè)心肌組織中Sirt1和乙酰化p53(Lys373&382)的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、各組心肌細(xì)胞凋亡率的比較:與IR組相比，RES+IR組心肌細(xì)胞凋亡率顯

5、著降低(P＜0.05）;而與RES+IR組相比，RES+EX+IR組心肌細(xì)胞凋亡率顯著增加（P＜0.05）。IR組與EX+IR組的心肌細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意、各組缺血再灌注后心肌細(xì)胞中促凋亡蛋白BAX的表達(dá)量的比較:與IR組相比，RES+IR組心肌細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白BAX的表達(dá)量顯著降低(P＜0.05);而與RES+IR組相比，RES+EX+IR組心肌細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白BAX的表達(dá)量顯著增加(P＜0.05)。IR組與EX+IR組的心肌細(xì)胞

6、內(nèi)促凋亡蛋白BAX的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2、各組心肌細(xì)胞中Sirt1表達(dá)量和乙?；痯53(lys373&382)的表達(dá)量的比較:與IR組相比，RES+IR組心肌細(xì)胞內(nèi)Sirt1表達(dá)量顯著增加而乙?；痯53(lys373&382)表達(dá)量顯著降低(P＜0.05);而與RES+IR組相比，RES+EX+IR組心肌細(xì)胞內(nèi)Sirt1表達(dá)量顯著降低而乙?；痯53(lys373&382)表達(dá)量顯著增加(P＜0.05