九龍?zhí)倏傸S酮對(duì)心肌缺血-再灌注損傷細(xì)胞自噬及凋亡的作用.pdf

1、目的：課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)九龍?zhí)倏傸S酮(Bauhinia championii flavones，BCF)有抗心肌缺血再灌注損傷的作用，本實(shí)驗(yàn)研究BCF對(duì)細(xì)胞自噬及凋亡的調(diào)控作用。
　　方法：⑴將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)、模型、BCF高劑量(20 mg·kg-1)、BCF低劑量（10 mg·kg-1）、自噬抑制劑3-MA(15 mg·kg-1)、Caspase-3抑制劑Z-VAD-FMK（1 mg·kg-1）六組（n=8），采取結(jié)扎左

2、冠狀動(dòng)脈前降支的方法制備大鼠心肌缺血（缺血30 min.）及缺血/再灌注損傷（缺血30 min.再灌注1h.及3h.）模型。⑵查看造模前后大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖的改變，用紫外分光光度法檢測(cè)假手術(shù)、模型、BCF高劑量、BCF低劑量、3-MA組心肌缺血30min、缺血/再灌注1h.及3h.時(shí)血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活力及總抗氧化能力(T-AOC);以Western-blot法檢測(cè)心肌微管相關(guān)蛋白輕鏈3蛋白-

3、Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1、雷帕霉素靶(mammalian targetof rapamycin，mTOR)蛋白的表達(dá)。⑶Western-blot法檢測(cè)Bcl-2蛋白在假手術(shù)、模型、BCF高劑量、BCF低劑量、Z-VAD-FMK組心肌缺血30min、缺血/再灌注1h.及3h.時(shí)的表達(dá)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(FQ-PCR)分析Caspase-3目的基因表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：①與模型組相比，BCF能劑量依賴性提高心肌缺血

4、/再灌注不同時(shí)段的T-AOC，降低CK-MB及iNOS活性，下調(diào)LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表達(dá)，上調(diào)mTOR蛋白表達(dá)(P＜0.05或P＜0.01);與3-MA組相比，BCF能夠降低iNOS及CK-MB，提高T-AOC水平，缺血期上調(diào)LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表達(dá)，再灌注期下調(diào)LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表達(dá)，缺血/再灌注期均下調(diào)mTOR蛋白表達(dá)（P＜0.05）。②與模型組相比，BCF在缺血/再灌注三個(gè)時(shí)段均可劑量依賴性地