枸杞多糖的結(jié)構(gòu)分析及生物活性評(píng)價(jià).pdf

1、枸杞多糖作為天然多糖中的重要一員，在祖國(guó)的中醫(yī)藥中具有特殊的重要地位。本文在前人已有研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)開(kāi)展枸杞多糖的提取、結(jié)構(gòu)及生物活性的研究，并采用激光掃描共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、原位末端標(biāo)記等生物學(xué)前沿技術(shù)從細(xì)胞凋亡角度探討了枸杞多糖的抗腫瘤作用機(jī)制，同時(shí)提出了枸杞多糖新的分離程序及簡(jiǎn)便準(zhǔn)確測(cè)定枸杞子水提物中多糖含量的方法。主要研究結(jié)果如下： 1.枸杞多糖的特性及結(jié)構(gòu)表征 作者提出了枸杞多糖新的分離程序：枸杞子通過(guò)

2、粉碎、提取分離、真空濃縮、脫色、脫蛋白、凝膠滲透色譜、冷凍干燥、純度監(jiān)測(cè)等程序，獲得組分單一的精制枸杞多糖，得率2.21％(W／W)。 經(jīng)檢測(cè)，上述分離程序得到的精制枸杞多糖中含中性糖45.09％、蛋白質(zhì)6.98％、半乳糖醛酸46.76％。氣相色譜測(cè)得枸杞多糖的中性糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖六種單糖組成，其摩爾比例為0.72：5.82：0.52：0.26：l：4.48；由紅外光譜圖可知：枸杞多糖中含有-C

3、OOH、OH和-NH<,2>或-NH-基團(tuán)，糖鏈中含有β-D-吡喃葡萄糖、α-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃半乳糖；β-消去反應(yīng)證明多糖鏈和氨基酸間為-O-型連接；剛果紅實(shí)驗(yàn)表明枸杞多糖不具有三股螺旋結(jié)構(gòu)；碘．碘化鉀反應(yīng)表明枸杞多糖存在較長(zhǎng)的側(cè)鏈和較多的分枝：經(jīng)掃描電鏡觀察，枸杞多糖表面呈松散的碎片狀聚集態(tài)。 2.枸杞子水提物中多糖含量的測(cè)定 本文首次提出測(cè)定枸杞子水提物中多糖含量的簡(jiǎn)便方法。以不同溶劑去除枸杞子水提物中的

4、單糖、低聚糖、色素等雜質(zhì)后，采用苯酚．硫酸法測(cè)定多糖含量，測(cè)定波長(zhǎng)為490nm，多糖換算因子f=3.26；在7～491ag／mL范圍內(nèi)，其濃度與吸光度線性關(guān)系良好，R<'2>=0.9984；多糖的平均回收率為99.74％，RSD為1.83％(n=6)；測(cè)定枸杞子水提物中多糖的含量為3.86％；該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，也可作為其它水提物中多糖含量的測(cè)定方法。 3.枸杞多糖與人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的關(guān)系 枸杞多糖具有誘

5、導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗(yàn)證明在添加有枸杞多糖6.25mg／L～100 mg／L的培養(yǎng)液中，人宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖受到顯著抑制；細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察(普通光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡、透射電鏡)發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖可誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡，細(xì)胞呈現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)；原位末端標(biāo)記法表明枸杞多糖可使細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著提高。 流式細(xì)胞儀、激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖能將人宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖過(guò)程阻滯于S

6、期，并顯著降低線粒體跨膜電位，增加HeLa細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子濃度。同時(shí)試劑盒檢測(cè)結(jié)果表明，HeLa細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量顯著增加、NOS及iNOS活性均顯著增強(qiáng)，細(xì)胞膜中唾液酸含量顯著降低。上述結(jié)果預(yù)示人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡發(fā)生的機(jī)制可能與上述因素的變化密切相關(guān)。 4.枸杞多糖對(duì)小鼠移植性肝癌的體內(nèi)抑制作用 各組實(shí)驗(yàn)小鼠在接種前每天分別以灌胃和腹腔注射兩種方式給予枸杞多糖(5mg/kg、lOmg/kg、20mg/kg)，

7、連續(xù)兩周，接種后繼續(xù)以上述方式用藥10天，均可顯著抑制肝癌移植瘤的生長(zhǎng)，且以腹腔注射方式用藥抑瘤效果更好，當(dāng)枸杞多糖劑量達(dá)20mg/kg時(shí)，通過(guò)腹腔注射給藥，對(duì)腫瘤的抑制作用與陽(yáng)性藥物環(huán)磷酰胺接近，抑瘤率達(dá)到73.5％；可顯著提高其T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力和NK細(xì)胞活性，增強(qiáng)荷瘤小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)；提高其肝組織中SOD活力，降低MDA含量。提示枸杞多糖對(duì)小鼠移植性肝癌的體內(nèi)抑制作用可能是通過(guò)增強(qiáng)荷瘤小鼠的免疫功能和提高機(jī)體的抗氧化活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的

8、。 5.枸杞多糖對(duì)高鵬血癥小鼠血脂的調(diào)節(jié)作用 枸杞多糖對(duì)血脂具有明顯的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行高脂飲食的同時(shí)每天以5 mg/kg、10mg/kg和 20mg/kg的枸杞多糖灌胃，連續(xù)6周后，可有效抑制高脂飲食小鼠體重的快速增長(zhǎng)，明顯降低實(shí)驗(yàn)小鼠血清中TC、TG含量，并可升高HDL-C及HDL-C/TC水平，降低LDL-C水平；抑制肝組織中的TC、TG含量的升高；顯著提高實(shí)驗(yàn)小鼠肝組織中SOD的活力，降低其MDA的含量；增大