沙海蜇ACE抑制肽制備及預(yù)防高血壓效果與機(jī)理研究.pdf

1、我國(guó)沙海蜇資源豐富,近年來(lái)甚至頻繁出現(xiàn)爆發(fā),但由于目前沙海蜇的加工方式比較單一,使沙海蜇資源沒(méi)有得到充分利用。本文試圖建立一種新的沙海蜇加工方法,即將其酶解、脫腥、脫鹽、噴霧干燥后制成一種新的食源性ACE抑制肽,并對(duì)沙海蜇ACE抑制肽預(yù)防高血壓的效果和機(jī)理進(jìn)行研究。
　　首先,對(duì)用堿性蛋白酶酶解新鮮沙海蜇制備 ACE抑制肽的酶解條件進(jìn)行了研究。先后以水解度(DH)和ACE抑制率為指標(biāo),經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)得到最佳的酶解條件為:酶

2、解溫度50℃、加酶量5％、酶解起始pH9.5。采用改進(jìn)的高效液相色譜法測(cè)定 ACE抑制率,發(fā)現(xiàn)新鮮沙海蜇在以上條件下酶解7h時(shí)所得多肽的ACE抑制率最大。所得ACE抑制肽脫鹽凍干后,測(cè)定在0.5mg/mL濃度時(shí) ACE抑制率為54.53%。最后,通過(guò)排阻色譜法測(cè)得其相對(duì)平均分子量約為500Da。
　　然后,對(duì)沙海蜇ACE抑制肽酶解液進(jìn)一步加工制備成ACE抑制肽的工藝條件進(jìn)行了研究。該工藝條件主要包括脫腥、脫鹽和噴霧干燥三個(gè)過(guò)程,并

3、對(duì)制得的沙海蜇 ACE抑制肽的成分進(jìn)行了分析。以蛋白質(zhì)損失率(%)和三甲胺含量(mg/L)為指標(biāo),經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)得到最佳的脫腥條件為:活性炭添加量(w/v,g/mL)0.2%,脫腥溫度20℃、脫腥時(shí)間40mim。脫腥后的沙海蜇酶解液經(jīng)減壓濃縮、0.45μm濾膜抽濾,200納濾膜脫鹽,噴霧干燥(進(jìn)風(fēng)溫度165-175℃,出風(fēng)溫度85-95℃)后得到白色沙海蜇ACE抑制肽粉,并測(cè)得其蛋白質(zhì)含量為81.50±0.42%、水分含量為6.

4、23±0.24%、鹽分含量為2.88±0.11%、脂肪含量為0.21±0.03%、糖分含量為5.97±0.21%,為低脂低糖的健康功能性食品。
　　最后,研究了所得沙海蜇ACE抑制肽對(duì)L-NAME致高血壓發(fā)生的預(yù)防作用和機(jī)理。80只大鼠隨機(jī)分成5組,對(duì)照組灌胃蒸餾水(0.5mL/d),L-NAME組灌胃L-NAME(20mg/Kg.bw),低、高劑量沙海蜇ACE抑制肽組(簡(jiǎn)稱低、高劑量組)灌胃 L-NAME(20mg/Kg.bw)

5、的同時(shí)分別灌胃100mg/Kg.bw和500mg/Kg.bw的沙海蜇ACE抑制肽,卡托普利組灌胃L-NAME(20mg/Kg.bw)的同時(shí)灌胃10mg/Kg.bw的卡托普利。灌胃前和灌胃1、2、3周時(shí)測(cè)量大鼠體重和血壓。灌胃1周后,5組大鼠血壓差異明顯。為研究大鼠血壓和血漿中血壓相關(guān)因子的關(guān)系,5組大鼠各處死一半(8只),測(cè)定血漿中ACE、腎素(PRA)、NO、NO合成酶(NOS)、AngⅡ的活性或含量。灌胃3周后,處死剩余大鼠,測(cè)定大

6、鼠血漿和尿液中ACE、NO、NO合成酶(NOS)及尿微量蛋白(MAU/ALB)的含量,并計(jì)算心臟和腎臟指數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),灌胃L-NAME可使大鼠血漿中NO和 NOS含量降低,同時(shí)激活 RAAS,并導(dǎo)致血壓的顯著升高。但可能是由于L-NAME的灌胃劑量不夠高,灌胃L-NAME后大鼠血壓先上升然后下降并逐漸趨于正常水平。沙海蜇 ACE抑制肽在 L-NAME致高血壓模型中可以起到抑制ACE活性、AngⅡ含量上升,促進(jìn)L-NAME導(dǎo)致的高血壓向正